His标记蛋白质微量纯化套装北京现货促销

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名称：His标记蛋白质微量纯化套装北京现货促销
产地：国产|进口
英文名：One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
编号：BTN100102A
规格：2mL
本产品基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，本产品就是专门用于上述实验的一站式产品。

产品特点：
1.一站式套装，含所需的介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达His蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
3.变性和非变性条件均可使用，也适用于纯化包涵体中的His标记蛋白。
4. 每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供4mL浓度为50%的Ni-Agarose介质，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质。
6. 介质为CL-6B琼脂糖，含四个Ni离子螯合基团，比只有四个Ni离子螯合基团的Ni-IDA更有效。
7. 本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成：

 

成份	规格
Ni-Agarose介质，50%	4mL
1M咪唑溶液	25mL
1M Tris-HCl pH7.9	25mL
5M NaCl溶液	25mL
溶菌酶(20 KU/mg)	30mg(A型无)
Benzonase(2U/μL)	20μL(A型无)
盐*(代"酸")胍	6g
尿素	20g
PMSF(10mg/mL)	0.5mL
亲和层析柱，6mL	1套
使用手册	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：去离子水、20%乙醇、0.45μm滤膜

使用方法：
1．将Ni-Agarose介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据His蛋白产量决定，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质，请根据实验需要取适量的Ni-Agarose介质加入层析柱)。
2．用5倍柱体积(指填料的体积，下同)自备去离子水洗柱，共三次。
3．用5倍柱体积的新配结合液洗柱(配方如下，以10mL为例)，共三次：

成分	用量	在结合缓冲液中浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	0.2mL	20mM
1M咪唑溶液	0.1mL	10mM
5M NaCl溶液	1mL	500mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．室温5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，沉淀(约100mg)放冰上待用或放-80℃保存。最好用不加诱导物的菌液做对照样。
5．如果用本产品A型：加入1mL冰浴的结合液(1mL菌液需要用50μL结合液)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。如果用本产品B型：加入1mL冰浴的含溶菌酶的结合液(先取20mL结合液，加入所有30mg溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，剩余的-20℃放置)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液和1μL Benzonase，冰上放置30分钟。
6．4℃下13000-15000g离心10分钟，去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清，留样做SDS-PAGE电泳对照。如果要纯化裂解液中可溶部分的His标记蛋白，则直接进入第7步；如果要纯化裂解液中包涵体(沉淀部分)中的His标记蛋白，则直接进入第12步。

A、纯化细胞裂解液中可溶部分的His标记蛋白
7．将上步得到的上清液上柱，让重力使裂解液自然流出。如要提高His标记蛋白与介质的结合效率，可用试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。
8．用10倍柱体积结合液洗柱(配方见上表)，收集并保存穿透液(含杂质或没被吸附的His标记蛋白，可做SDS-PAGE电泳的对照)。
9．如果用一步式洗脱法(适合已经找到最佳咪唑浓度的情况)，则直接用适量的新鲜配制的洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含His标记蛋白)。洗脱液的配方如下(以1mL体积和最佳咪唑浓度是500mM为例)：

成分	用量	在洗脱液中的浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20mM
1M咪唑溶液	500μL	500mM
5M NaCl溶液	100μL	500mM
自备去离子水	380μL	-

10．如果用多步式洗脱(适合不知道最佳咪唑浓度或一步式洗脱杂质多的情况)，则按上表配制一系列咪唑浓度不同(如40、60、100、200、300和500mM)，其他成分浓度不变的洗液，按从低到高的顺序洗涤并收集样品，SDS-PAGE电泳检测His标记蛋白所在的区域。
11．洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，最后堵住层析柱下端的漏口，4℃保存待下次使用。

B、纯化包涵体中His标记蛋白
12．将第6步离心得到的包涵体沉淀重悬于1-3mL含盐*(代"酸")胍结合液中或1-3mL含尿素结合液中(建议优先使用尿素做变性剂，因为得到的洗脱液可以直接跑SDS-PAGE，而用盐*(代"酸")胍的洗脱液需先除盐后才能电泳)。冰浴1小时以使包涵体溶解，期间可轻柔摇晃几次。含变性剂的结合液配方如下(以10mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍结合液	含尿素结合液
1M Tri-HCl(pH7.9)	200μL	200μL
5M NaCl溶液	1mL	1mL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	5.7g	无
尿素(MW=60.1)	无	4.8g
自备去离子水	加水到10mL	加水到10mL

13．室温10000×g离心20分钟，沉淀为未溶解的包涵体。将上清(含溶解后的His标记蛋白)以自备的0.45μm滤膜过滤。
14．将滤过液上柱，后续纯化步骤同第7-第11步。只是所用结合液和洗脱液均含变性剂，含变性剂的洗脱液配方见下表(以1mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍洗脱液	含尿素洗脱液
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20μL
1M咪唑溶液	500μL	500μL
5M　NaCl溶液	100μL	100μL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	0.57g	无
尿素(MW=60.1)	无	0.48g
自备去离子水	补水到1mL	补水到1mL

注意事项：整个实验需避免含巯基乙醇、DTT和EDTA等成分。若洗脱液不能将His标记蛋白洗脱下来，可改用pH6.5- 4.5的pH递减的Tris-HCl洗脱。

更多有关His标记蛋白质微量纯化套装北京现货促销的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·DNA洗脱液
编号：BTN70705
规格：10mL

·Southern DNA Marker DL2000(DIG标记)
编号：BTN120654D
英文名称：Southern DNA Marker DL2000(Labeled by DIG)
规格：20次

·蛋白胶中量回收试剂盒
编号：BTN90403
英文名称：Protein Gel Midi-Extraction Kit
规格：5次
十二烷基硫*(代"酸")*-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一，随着蛋白质技术的微量化，有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、*基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门为此用途开发的中量蛋白胶回收法。

产品特点：
1．简单，不需要复杂而昂贵的仪器(如电洗脱仪)。
2．适用于变性胶(SDS-PAGE)和非变性胶。
3．每次可以处理1g的PAGE胶(具体多少蛋白质取决于上样的浓度)。
4．回收率一般在50-90%之间(跟蛋白质大小，洗脱时间相关)。
5．跟后续的实验兼容，包括2-D电泳、质谱测序等。

产品组成：

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B	50ml
20mL塑料注射器	5只
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．按常规方法进行变性(SDS-PAGE)或非变性蛋白电泳。
2．切取含目的蛋白的胶(尽可能地把多余的胶切除，否则会影响回收效率)。
 注意：固定和染色后蛋白回收效果很差，所以建议把样品分多孔上样，电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色，然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置，通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区域，并切下此区域的胶进行回收。
3．将切下的、重量不超过1 克的胶块转移到30mL塑料注射器中。
4．用塑料注射器推杆将胶块从端口挤压出去，使之变成细小的碎片，用自备的15mL塑料离心管收集这些破碎的凝胶颗粒。
5．加入1mL溶液A，4℃摇晃洗脱至少2-16小时(过夜)。此时最好将将要使用的溶液B放在冰箱预冷。
6．10000g离心10分钟，转移上清到新的10-15mL的塑料离心管中，注意不要吸取碎胶。
7．加入5倍体积的预冷的溶液B，摇晃混匀。
8．-20℃放置至少10-30分钟。
9．室温12000g(注意：一定要检查使用的离心管是否能够耐受次离心力，如果不能建议将溶液分到1.5mL的塑料离心管中再进行离心处理)离心5-20分钟，弃上清。
10．室温充分晾干，得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适当的缓冲液中，可用于后续实验(2-D电泳、质谱测序等)。


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庚二酸 4-Hydroxyphenylpyruvic acid 111-16-0
ARB11056 人*丙*(代"酸")诺龙/*丙*(代"酸")去甲睾酮(NP)免费代测 Human nandrolone phenylpropionate,np ELISA KIT
2-*基*并咪唑 Thrombin 934-32-7
ARB14039 植物凝脂酸(PA)酶免分析 Plant phosphatidic acid,pa ELISA KIT
NF-211 羊抗人C3C血清
PY02-306  5%乳糖培养基  250克  
NF-241 兔抗绵羊红细胞(溶血素)
F030205 HRP标记山羊抗小鼠IgG抗体 Goat Anti-Mouse IgG*HRP
9002-18-0 琼脂粉 Agar,Powder
Tris*盐缓冲液(10×,pH7.8)   500ml
乙酸银 Hydroxy naphthol blue disodiu*(代"m") salt 563-63-3
001000 胎牛血清
ARB11518 人胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)检测服务 Human thymic stromal lymphopoietin,tslp ELISA KIT
二十二烷酸 5′-CDP,2Na 112-85-6
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·水饱和酚
编号：BTN3190
英文名称：Water-Saturated Phenol
规格：100mL
本品是将重蒸馏酚用水充分饱和而得，pH在7左右。水饱和酚不会再吸收样品的水分。本产品可以用于配制TRIzol，也直接用于RNA提取。

储存条件：常温运输和保存、避光。有效期一年。

疑难解答：
Q：分子生物学实验为何需要使用饱和酚？
A： 酚跟水有一定程度的互溶，酚水混合液中水相中一般有8-10%的酚，酚相中一般有12%的水，互溶的比例还跟温度、盐离子等相关(比如，65℃时，水和酚彻底互溶，不再分相)。如果使用未饱和的酚处理样品，则分相后样品的体积将减少，所以为了避免样品的丢失，需要使用没有吸水能力的各种饱和酚。

·PCR级甲酰胺
编号：BTN100839
英文名称：Formamide，PCR Grade
规格：250mg
本产品为PCR级的甲酰胺，其可以促进某些引物、模板退火，降低带有二级结构的DNA的变性温度，是一种常用的PCR增强剂。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

·柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法)
编号：BTN80926
英文名称：Fungus DNA Column large-scale extraction kit(Glass bead method)
规格：4次
本试剂盒在柱式真菌DNA提取试剂盒(BTN70901)基础上改良而得大提升级产品，主要用于大量快速从各种真菌材料中提取基因组DNA。

产品特点：
1.处理量大，一次可以处理1-3g 各种真菌组织。
2. 纯度高，OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制剂，得到的DNA可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplex PCR、RAPD、RELP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis等各种后续分子生物学实验。
3. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA。
4.产率一般在10-100μg/g真菌样品。离心吸附柱最大吸附量为800μg。
5. DNA片段长度一般在20-40kb左右。
6.适用范围广，适用于度大多数真菌材料，包括酵母(S.cerevisiae、S.pomb、Pichia pastoris)等。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	40ml
溶液B	40ml
溶液C	100ml
大提离心吸附柱	4套
通用洗柱液	200ml
DNA洗脱液2.0	5ml
酸洗玻璃珠，400μm	40g
说明书	1份

储存条件：常温运输,4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对菌液：取60-100mL 过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约1 g)，转移到装有20mL 无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料，一般取1-3g左右，直接加入到离心管中，在材料中加入无菌水20mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
4.沉淀中加入10mL溶液A和10 克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟，可以延长震荡时间。
5. 加入10mL的溶液B，涡旋震荡5分钟，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个50mL的干净的塑料离心管中。
6.在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
7. 将20mL 通用洗柱液加入离心柱，12000rpm离心1分钟，弃穿透液。
8. 重复上步操作一次。
9. 12000rpm 空甩1分钟去除残留液体。
10. 将离心柱放置在一新的50mL塑料离心管中，加入500μL DNA 洗脱液2.0。
11.室温放置5分钟后12000rpm离心1分钟，管底即为真菌DNA样品，吸取离心管中的DNA溶液重新滴加在吸附柱上，离心洗脱以收集更多的DNA。
12. 所得DNA可立即使用，也可长期保存在－20℃。
13. 注：如离心机转速不能达到12000rpm，可以用最大转速离心10-15min 代替12000rpm离心1-2min。

我公司正在优惠促销蛋白质研究等系列产品，期待您的咨询选购His标记蛋白质微量纯化套装北京现货促销。