北京现货一站式GST标记蛋白质微量纯化套装打折促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货一站式GST标记蛋白质微量纯化套装打折促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货一站式GST标记蛋白质微量纯化套装打折促销
规格：20次
编号：BTN111116A
品牌：百奥莱博
英文名：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
产地：国产|进口
重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。
3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。
4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。
6．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

 

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。
2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌，注意防止污染。
3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重组蛋白的表达和细菌收集
1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。
3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。
4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、细胞裂解
5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。
7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化
8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。
10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。
13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)
1．用3倍体积的6M盐*(代"酸")胍处理柱子10分钟。
2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。
3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。
4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。
5．再重复3-4 步两次。
6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。
7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

欲咨询购买北京现货一站式GST标记蛋白质微量纯化套装打折促销，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：
羟基乙酸 Polyamide 79-14-1
ARB13151 小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)尿液中含量检测 Mouse glial fibrillary acidic protein,gfap ELISA KIT
巴比*(代"妥")*缓冲液(0.1mol/L,pH8.6)   100ml|500ml
BFD055 喹诺酮快速检测卡
BTN120630 Fluorescein -12- dUTP溶液 Fluorescein -12- dUTP Solution
次硝酸铋 Aluminum acetate basic 1304-85-4
F010207 小鼠抗鸭IgG(IgY)抗体 Monoclonal Mouse Anti-Duck IgG(IgY)
ET101 Taq DNA Polymerase
全血丙*(代"酮")酸检测试剂盒(乳酸脱*酶微板法)   50T
HC0169 载玻片
F030212 HRP标记山羊抗兔IgG抗体 Goat Anti-Rabbit IgG*HRP
L-山梨糖 Rnase&Dnase away 87-79-6
HC0031 175cm2培养瓶(5个/包)
北京现货一站式GST标记蛋白质微量纯化套装打折促销关键词：BTN111116A,一站式GST标记蛋白质微量纯化套装,One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(A)


·大肠杆菌DNA连接酶
编号：BTN120419
英文名称：E.coli DNA Ligase
规格：1000U
本酶催化相邻DNA链的5´-P末端和3´-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需NAD作辅酶。本酶只能催化突出末端DNA之间的连接，但如果在PEG及高浓度一价阳离子存在的条件下，也能连接平滑末端的DNA，但不能催化DNA的5´-P末端与RNA的3´-OH末端以及RNA之间的连接。其工作原理图如下：


产品用途：
1．DNA片段和载体DNA的连接。
2．DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。
3．cDNA的第二条链的合成。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：在20μl的连接反应体系中，6μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为一个活性单位。

纯度：
1．360U的本酶和1μg的λ-Hind III片段在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2．360U的本酶和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发变化。
3．360U的本酶和1μg的16S，23S rRNA在37℃下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

备注：BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。


北京现货一站式GST标记蛋白质微量纯化套装打折促销关键词：BTN111116A,一站式GST标记蛋白质微量纯化套装,One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(A)

ARB11832 人鞘磷脂(SM)代做ELISA实验 Human sphingomyelin,sm ELISA KIT
ARB14176 人可溶性CD14(sCD14)Elisa方法检测 
BOC-D-缬*酸 ConA 22838-58-0
ARB12460 大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)代做ELISA实验 Rat corticotropin releasing hormone,crh ELISA KIT
尿胰蛋白酶抑制剂 BTB 164859-77-2
PY01-141  马铃薯浸出粉  250克  
CYB168011 猪血清 500ml/瓶
37340-57-1 溶壁酶 Lyticase
HC0104 13mm针头式滤器
蛋白浓缩试剂盒   50T
ARB10695 人肌球蛋白轻链(MLC)ELISA检测服务 Human myosin light chain,mlc ELISA KIT
ARB10295 人天门冬*酸转*酶/谷草转*酶(GOT/GPT)Elisa分析 Human aspartate aminotransferase,got/gpt ELISA KIT
BL1264 50ml离心套管
BTN130695 m7G(5′)ppp(5′)A帽结构类似物 RNA Cap Structure Analogs
PY02-272  5%乳糖发酵培养基  250克  
BTN100867 SDS-PAGE浓缩胶配胶液 SDS-PAGE Stacking Gel Buffer
F030305 胶体金标记兔抗牛血清白蛋白抗体 Rabbit Anti-BSA*GOLD
ARB12700 大鼠糖皮质激素受体α(GR-α)免费代测 Rat glucocorticoid receptor-α,gr-α ELISA KIT
麦芽四糖 Dodecenylsuccinic anhydride 34612-38-9
低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测试剂盒(PVS比色法)   50T|100T

北京百莱博科技有限公司是蛋白质研究产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购北京现货一站式GST标记蛋白质微量纯化套装打折促销。