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- 杭州纽龙生物
- NRPC04A-03P
- 杭州
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
20%乙醇，2 ~ 8℃
- 保质期：
3年
- 英文名：
Instructions for Recombinant Protein A Conjugated to NUPharose Resin
- 库存：
大量
- 供应商：
杭州纽龙生物科技有限公司
- 规格：
5ml、10ml
| 品 名 | 重组蛋白A 琼脂糖凝胶FF |
| 英文名 | Recombinant Protein A NUPharose Fast Flow, rProtein A NUPharose FF |
| 目录号 | NRPB01L、NRPB01S(预装柱) |
| 规 格 | 20 ml，100 ml，1 L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，10 ml预装柱，特殊规格订制 |
| 运 输 | 2 ~ 25℃，常压、避光 |
| 贮 存 | 20%乙醇，2 ~ 8℃ |
| 保质期 | 3 年 |
相关介绍：
蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，包含有5个区域，可以同IgG的Fc片段结合。作为一个亲和配基，蛋白A能够比较紧密地偶联到NUPharose上，使得这些区域可以同游离的IgG自由结合。一分子的蛋白A可以结合两分子的IgG。
技术指标：
| 基质 | 4%高度交联琼脂糖凝胶 |
| 配基 | 重组蛋白A |
| 配基密度 | ≥ 6 mg/ml |
| 填料粒径 | 60 ~ 180 μm |
| 最大流速 | 800 cm/h |
| 推荐流速 | 20 ~ 100 cm/h |
| pH稳定性 | pH 3 ~ 9 |
| 耐反压 | 0.3 MPa |
| 载量 | ≥40 mg/ml IgG |
| 种类 Species |
亚型 Antibody Class |
蛋白A Protein A |
蛋白G Protein G |
| 人 Human |
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab |
+++ +++ + +++ + - + + |
+++ +++ +++ +++ - - - + |
| 小鼠 Mouse |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM |
+ +++ +++ +++ - |
++ +++ +++ +++ - |
| 大鼠 Rat |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c |
+ - - +++ |
++ +++ + +++ |
| 牛 Cow |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
| 山羊 Goat |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
| 马 Horse |
IgG(ab) IgG(c) IgG(T) |
+ + - |
- - +++ |
| 兔Rabbit | IgG | +++ | +++ |
| 猪Pig | IgG | +++ | + |
| 狗Dog | IgG | +++ | + |
| 鸡Chicken | IgY | - | - |
应用举例：
结合缓冲液：20 mM磷酸缓冲液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸缓冲液，pH 4.0
中和缓冲液：1 M Tris ~ HCl，pH 9.0
- 1 ml重组蛋白A琼脂糖凝胶预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；
- 用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积；
- 将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；
- 用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积；
- 用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；
- 每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 M 柠檬酸缓冲液（pH 3.0）再生清洗；
- SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。
- 预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
- 样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
- 使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子。
- 通常（每次）目标样品洗脱后应继续用0.1 M柠檬酸缓冲液（pH 2 ~ 3）洗3 ~ 5个柱体积，然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上，作简易再生。
- 使用数次后应进行在位清洗，建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3个柱体积（10 ~ 30 min），立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上；或70%乙醇洗5个柱体积以上（可保持4 ~ 16 h），再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类，恢复柱子的载量和流速。
| 推荐流速 | |||
| 预装柱体积 | 1 ml | 5 ml | 10 ml |
| 流速(ml/min) | 0.2 | 1 | 2 |
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文献和实验材料 琼脂糖凝胶介质镍亲和柱 紫外检测仪 蛋白电泳装置及夹子、玻璃板、灌胶支架、缓冲液槽等附件 5 ml 注射器 0.45 μm 滤器 超声破碎仪 试剂 1. 结合缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，10 mM 咪唑，pH=8.0 2. 洗脱缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，不同梯度浓度的咪唑，pH=8.0 3. 20%乙醇 4. 三蒸水 5. 透析液：20 mM Tris
【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。
[img][/img]Protein A 柱之进化 Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将Protein A 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。 早期的Protein A柱结合的都是天然Protein A。天然Protein A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图1所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然
，蛋白A 琼脂糖凝胶FF 有很好的稳定性，能耐受37 度3-5 天而对柱子的性能没有影响，是分离抗体的最佳选择。疏水色谱色谱填料苯基琼脂糖凝胶FF 以及DEAE 琼脂糖凝胶FF 也场用于抗体的分离，只是特异性不如重组蛋白A 琼脂糖凝胶FF 好。纯化IgG 抗原最有效的办法是免疫亲和，具体的方法是把抗抗原的IgG 直接偶联到环氧活化琼脂糖凝胶FF 上，然后直接高pH 吸附，低pH 洗脱就可以得到需要的抗原。对于高亲和力的抗体筛选，特别是小分子的半抗原，我们建议可以把半抗原偶联到环氧活化琼脂糖凝胶FF
