北京柱式真菌RNA提取试剂盒现货供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京柱式真菌RNA提取试剂盒现货供应，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京柱式真菌RNA提取试剂盒现货供应
英文名：Fungal RNA Column extraction kit
编号：BTN80804
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本试剂盒是在本公司真菌RNA提取试剂盒(BTN60305)基础上改进的柱式产品，跟真菌RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1. 柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
2. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Norther杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
3. RNA产量高，一般在 20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态和各个种属的真菌及革兰氏阳性细菌，包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe 、 Pichia pastoris 、Bacillus subtilis、Staphylococcusaureus等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	20ml
溶液B	25ml
溶液C	75ml
溶液D	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mg左右的干菌丝(或100mg左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落)转移到 1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1-10mL液体真菌在 1.5mL塑料离心管中 12000～15000g离心 1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.4mL溶液A 并充分吹打混匀。如果 A溶液存放时产生沉淀，请置于65℃融化，用前充分摇晃均匀。
3. 加入0.4mL溶液B，剧烈振荡 30秒。
4. 65℃保温 5分钟。
5.室温 12000～15000g离心 3～5分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自备*仿，振荡混匀 30秒。
7.室温 12000～15000g离心 3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的5mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清 3倍体积的溶液C(约1.2-1.5mL)和1倍体积的溶液D(约0.4-0.5mL)，充分混匀。
9. 将混合液(约2.5mL)分 3-4次转 移 到离 心 吸 附 柱中 。 每次13000-15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
10. 用 0.5mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11.一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.5mL 通用洗柱液重复此步一次。
12.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响 RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414 ，2000)。 如 果是简 单 检 测 ，可以使 用 TAE或SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9:558，1990)。普通 DNA上样液不含变性剂，也没经过去 RNase处理，所以最好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用 TBE进行 RNA电泳，因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应，形成 RNA分子内或RNA分子间的络合复 合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组 DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而 RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反 应，使硼*(代"酸")对 RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对 RNA电泳的影响 没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
16. RNA产量产率测定：
 将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280，否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%。
17. RNA 纯度测定：
 无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用我公司的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。测 OD时 RNA 不能过度稀释使 OD 读数低于仪器的有效范围。

疑难解答：
Q：为何从酵母中提取的总 RNA 有 3 条小带？
A：它们分别是70bp左右的tRNA，120bp左右的5S RNA，160bp左右的5.8 S RNA。
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组 DNA吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物加 RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使 RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用 TAE或超快电泳液 SuperBuffer-2，最好不要使用 TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。

北京柱式真菌RNA提取试剂盒现货供应极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·地塞米松
编号：BTN131234
英文名称：Dexamethasone DXM Solution
规格：1mL
本产品为浓度为50mg/mL的地塞米松乙醇溶液。地塞米松(Acido*(代"c")ont,Deronil,Dexacortal,dexametona)又名*美松、*甲强地松龙、德沙美松。分子式：C22H29FO5，分子量：392.5，CAS号：50-02-2。溶于乙醇。地塞米松属于糖皮质类激素，具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制等作用。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

·10%Sarkosyl溶液(DNA级)
编号：BTN100914
英文名称：Dexamethasone DXM Solution
规格：250mL
本产品为浓度为50mg/mL的地塞米松乙醇溶液。地塞米松(Acido*(代"c")ont,Deronil,Dexacortal,dexametona)又名*美松、*甲强地松龙、德沙美松。分子式：C22H29FO5，分子量：392.5，CAS号：50-02-2。溶于乙醇。地塞米松属于糖皮质类激素，具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制等作用。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

·miRNA marker(miRNA电泳分子量标准)
编号：BTN70605
英文名称：miRNA Ladder
规格：30次
尿素-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Urea-PAGE)是目前分离100nt以下的小片段RNA分子，尤其是20nt左右的microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是目前作为miRNA电泳的分子量对照产品还很少，为此百奥莱博开发了本产品。

产品特点：
1. 范围在15-50nt，尤其适合于长度在20nt左右的miRNA的分子长度初步确定。
2.产品是单链DNA，变性胶上泳动行为类似于单链的RNA，但比RNA 更稳定。

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期为一年。

使用方法：
1. 将5μL 本产品与15μl 10M的尿素溶液(自备)或5μL miRNAload电泳上样液混合后直接上样。也可以使用样品所用的其它上样液。
2.电泳后用0.5μg/mL的EB溶液染色半小时后即可在UV下观察。

使用效果：

图注: 用5μL本产品在浓度为15%的PAGE(含7M尿素)上电泳(用1×TEB缓冲液),最后用0.5μg/mL的EB溶液染色。


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·细菌膜蛋白质微量提取试剂盒
编号：BTN100929
英文名称：Bacterial Membrane Protein Miniprep Kit
规格：50次
本试剂盒是基于超速离心的快速提取细菌膜蛋白的试剂盒。其原理是裂解细胞后，通过超速离心分离出细胞膜和附着的蛋白质。

产品特点：
1.一步式分离细胞膜和膜蛋白，密度梯度离心法简单快捷。
2. 膜蛋白纯度高，能够去除各种胞浆蛋白的污染，也能去除松散附着在细胞膜上的蛋白，所得膜蛋白主要是整合蛋白。
3. 膜蛋白完整性好，主要是由于实际中有抑制蛋白酶成分。
4. 回收效率高，一般能得到相当于总蛋白量6%的膜蛋白。
5.可用于E.coli，S.typhimurium，K.aerogens，P.aeruginosa，C.crescentus等细菌。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	125ml
溶液B	25ml
溶液C	250ml
DNase I干粉	3.5mg
说明书	1份

储存条件：低温运输和保存，DNase I 需要低温保存。有效期一年。

使用方法：
准备：第一次使用本试剂盒时需要将所有DNase I干粉倒入溶液B中，轻柔颠倒使DNase干粉溶解。未用完的部分需要放-20℃保存，最好在一个月内完，否则DNase 将逐渐失去活性。此外，最好在实验前1小时将溶液B冰浴预冷。

用法一：小量制备(主要用于上样量比较小的SDS-PAGE电泳等实验)
1．收集20-40mL 过夜培养的细菌饱和培养液(OD420在1.5左右即可)，2500g室温离心10分钟后弃上清。
2．加入2mL溶液A，轻柔吹打，将细菌重悬于溶液A中。
3．2500 g室温离心10分钟后弃上清。
4．加入0.5mL溶液B(必须已经提前加入了DNase I干粉)，轻柔吹打使细菌重悬。注：如果细菌起始量没有20-40mL，溶液A的用量可以等比例降低。重悬在溶液A中的细菌可以放-80℃长期保存。
5．用超声或French Press方法裂解细胞。如果用French Press方法，则需要处理至少两次，每次的压力为9.65×10E7(=14000 psi)。注意：不论用哪种裂解方法，都必须在显微镜下检查细菌是否已经裂解，否则还需要重复细菌裂解过程，直到80%以上的细菌都裂解为止。
6．2500g室温离心8分钟后小心转移上清到新的10mL-15mL塑料离心管中(如Beckman Optima 台式超速离心机离心管)，弃沉淀(未破裂细胞)。
7．在上清(细菌裂解液)中加入5mL预冷的溶液C，轻柔颠倒混匀后冰浴放置30-60分钟。其间可以轻柔颠倒混匀3-5次。
8．用 Bechman Optima 台式超速离心机115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
9．小心移弃上清，在沉淀中加入0.2mL溶液A，充分吹打混匀。
10．用Beckman Optima 台式超速离心机 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
11．小心移弃上清，所得沉淀放-20℃长期保存，也可以直接加入0.1mL自备的，跟后续实验兼容的缓冲液(如1×SDS-PAGE上样液中，可从本公司购买)，所得膜蛋白的浓度将在1mg/mL左右。

用法二：大量制备(主要用于上样量比较大的2D电泳等实验)
1．收集200-400mL 过夜培养的细菌饱和培养液(OD420在1.5左右即可)，2500 g室温离心10分钟后弃上清。
2．加入20mL溶液A，轻柔吹打，将细菌重悬于溶液A中。
3．2500 g室温离心10分钟后弃上清。
4．加入5mL溶液B(必须已经提前加入了DNase I干粉)，轻柔吹打使细菌重悬。注：如果细菌起始量没有200-400mL，溶液A的用量可以等比例降低。重悬在溶液A中的细菌可以放-80℃长期保存。
5．用超声或French Press方法裂解细胞。如果用French Press方法，则需要处理至少两次，每次的压力为9.65×10E7(=14000 psi)。注意：不论用哪种裂解方法，都必须在显微镜下检查细菌是否已经裂解，否则还需要重复细菌裂解过程，直到80%以上的细菌都裂解为止。
6．2500g室温离心8分钟后小心转移上清到干净的玻璃烧杯中，弃沉淀(未破裂细胞)。
7．在上清(细菌裂解液)中加入50mL预冷的溶液C，轻轻在冰浴中搅拌混匀30-60分钟。注：可以在大烧杯中装冰，然后将装有样品的小烧杯放入，在放入干净的搅拌子，以最低速度搅拌。
8．用 Beckman Type 55.2 Ti转头 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致。
9．小心移弃上清，在沉淀中加入2mL溶液A，充分吹打混匀。
10．用Beckman Type 55.2 Ti转头 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致。
11．小心移弃上清，所得沉淀放-20℃长期保存或溶解在1mL自备的，跟后续实验兼容的缓冲液(如1×等电点电泳上样液，可从本公司购买)，所得膜蛋白的浓度在1mg/mL左右。


北京柱式真菌RNA提取试剂盒现货供应关键词：Fungal RNA Column extraction kit,BTN80804,柱式真菌RNA提取试剂盒

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