植物RNA提取试剂盒促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

植物RNA提取试剂盒促销是高品质的RNA纯化产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多植物RNA提取试剂盒等RNA纯化产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：植物RNA提取试剂盒促销
品牌：百奥莱博
英文名：Plant RNA extraction kit
规格：50次
编号：BTN3080
本试剂盒是我们公司自主开发的独特产品，其原理完全不同于异硫*酸胍/酚/*仿提取方法，克服了后者不能区分RNA(本质上是多糖)和其他植物多糖的缺点，能高效将RNA和其他植物多糖分开，同时还能有效去除多酚和其他植物次级代谢成份。其有效性在近五十多种各类植物(见附录，包括十分棘手的松柏类植物)中得到验证。

试剂盒特点：
1.适用于绝大多数植物，从五十多种植物材料中都成功提取到了总RNA，其中包括松针、柏树、香蕉等用胍/酚/*仿方法未能提取到RNA的植物(注：部分植物组织，如果实，RNase含量极高，需要另外加RVC抑制其活性)。
2. 操作简单快速，最短可以只需要约十五分钟，可以全在室温下进行。
3. 得到的RNA平均 OD260/280在1.9左右，可直接用于RT-PCR和Northern等研究。

试剂盒组成：

 

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1、准备
a)估算试剂和组织细胞的用量并准备足够的*仿、75%乙醇和RNA溶解液(如RNApreserve、无RNase的水或有灭活残留RNase活性的液相RNase清除剂)。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
b)溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解。
2、匀浆
a)先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒，将不超过1mL的匀浆液转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。有的植物组织(果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
b)如果用砚磨法破碎植物组织，需将植物组织浸泡在1mL溶液A中再砚磨，尽量避免植物组织跟空气直接接触，然后将砚磨物转移到新的1.5mL离心管中。
3、第一次分相
a)在装有裂解物的离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
b)室温12000～15000g离心5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
c)将上清液(约0.8mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
4、第二次分相
a)在上清液中加入0.5mL的溶液C和0.2mL的自备*仿，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
b)室温12000～15000g离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
c)将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
5、沉淀
a)在上清液中加入0.5倍体积的溶液D，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。如果提取 50mg以下的微量植物组织样品，最好在此步加入我们公司的微量助沉剂RNApp。
b)室温12000～15000g离心3～5分钟，RNA将在管底形成白色沉淀(约黄豆大小)。如果组织样品量少或需要提高RNA回收率，也可以延长离心时间到20-30分钟。
c)小心移弃上清液，避免触及管底RNA沉淀。
注意：如果加入溶液D离心后沉淀漂浮在上面，说明植物糖份多，溶液比重大，可以少加植物样品，也可以适当加无RNase的水稀释直到沉淀能够沉下去为止。如果离心后管底有类似*仿的相出现，说明上一步离心时间不够或取上清时取到了下层的有机相，可以适当延长离心时间或取上清时留下约100μl不取或在第四步时加0.3mL的自备*仿。
6、第一次清洗
a)在离心管中加入1mL 75%的乙醇，振荡器上振荡混均30秒。
b)室温12000～15000g离心1分钟，RNA将在管底形成细小沉淀(约芝麻大小)。
c)小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
7、第二次清洗
a)重复第六步一次。
b)短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液,注意不要吸弃沉淀。此步将有效去除残留的乙醇，否则后续反应会受到影响。
8、溶解
a)加入适量(一般为20-100μl)RNA溶解液使RNA沉淀溶解，存放于-80℃或立即使用。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。
9、检测
a)RNA完整性的电泳检测
如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或我们公司的SuperBuffer-2 DNA/RNA两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用。
尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
由于动物细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由28S(约4800nt)，18S(约1900nt)和5.8S(约120nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果这两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则表示RNA有降解(因为大的RNA被酶降解的可能更大)。
跟动物一样，植物果实和种子的RNA一般有三条电泳带，但植物叶片的RNA有四条或更多rRNA带，多余的RNA来源于叶片中大量存在的叶绿体。
b)RNA产量产率测定
将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%，因为核酸光吸收跟溶液pH相关，而DEPC水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸，使溶液pH降低进而降低RNA的光吸收。RNA的产率还随组织的营养状态和组织的种类不同而不同，100mg种子的RNA产量一般为100-120μg，100mg叶片为30-60μg，100mg果实为20-40μg。
c)RNA纯度测定
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用我们公司的DNA Scavenger和PS Scavenger去除。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们公司初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用我们公司优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2,最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
Q：为何提取的RNA电泳时带型不清楚或根本没有条带？
A：可能原因：
  1、电泳没有使用MOPS缓冲液+甲醛变性胶；
  2、没有使用RNA专用的上样液或使用的RNA专用的上样液放置时间过长；
  3、植物组织样品中RNase很多，可以使用RVC(部分植物果实需要此处理)；
  4、植物组织中含多酚等影响提取的物质(如松柏等植物)，可以在溶液A中加入终浓度为0.1 M的硼*化*。

关于植物RNA提取试剂盒促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·非酶多糖清除剂(RNA样品专用)
编号：BTN60204
英文名称：Non-enzymatic Polysaccharide Scavenger
规格：10mL
用Trizol等方法提取的总RNA样品中经常会含有多糖(Polysaccharide，PS)污染,这些污染会影响下游的RT-PCR和Northern杂交等实验。目前没有十分有效的方法去除这一污染。我公司开发的非酶法PS清除剂能够比较好的解决这一问题。

产品特点：
1.高效，能有效地去除总RNA中的PS污染,使RNA溶液不再粘稠。
2. 不含RNase污染，RNA分子完整性不会受到任何影响。
3.快速，全部操作在样品管中完成，只需要二十多分钟。
4. 稳定，本产品为非酶产品，可以常温运输和4℃长期保存。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将十分粘稠的总RNA样品用RNase-free水稀释到100-500μl左右，加入等体积的65℃预热10分钟后的PS Scavenger，振荡器上充分振荡1分钟。
2. 加入等体积的*仿，振荡器上充分振荡1分钟。
3. 12000～15000g离心2分钟，转移上清到一新的离心管中，交界处将有白膜样的多糖沉淀。
4. 加入0.1倍体积的3 M NaOAc(pH5.2)和两倍体积的无水乙醇，混匀后12000～15000g离心10-20分钟。小心弃上清。
5. 加入1mL 75%乙醇，振荡器上短暂振荡后12000～15000g离心2分钟，小心弃上清。
6. 短暂离心，用移液枪小心吸去残留液体后，加入适量RNase-free水或具有灭活残留RNase的液相RNase Scavenger。立即使用或-80℃保存。

·一站式miRNA柱式提取试剂盒
编号：BTN80104
英文名称：One-stop miRNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。

试剂盒特点：
1.一步法直接分离纯化小RNA，比两步法(先分离总RNA和再纯化其中的小RNA)和PAGE电泳回收法更简单。得到的小RNA长度大部分在200nt以下，包括5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
2. 柱式操作，比miRNA提取试剂盒更加简单快捷，整个过程只需要十多分钟。
3.适用范围广，可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。
4.小RNA 纯净，OD260/280一般都在1.9以上。
5.产率一般为20-40μg/100mg动物组织。
6. 无基因组DNA的污染。
7.可用于RT-PCR、miRNA 标记、microarray等后续实验。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	100套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理100mg左右的各种组织，可以在1.5mL塑料离心管中。如果处理样品量大，请分成很多相当于微量提取的量进行，最后再收集在一起。

1. 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B按1:1的比例混合，然后根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用。注意：溶液A和溶液B混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL 新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜的动物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/mL裂解液，否则十分容易产生DNA污染。
d)对新鲜的植物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
e)对 RNAhold 保存动物或植物组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg组织加1mL新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL裂解物需0.2mL *仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000～15000g室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL)转移到一根离心吸附柱中以去除大RNA(最好标记以跟后面要用的专门吸附小RNA的另一离心吸附柱区别开来，本试剂盒提供的离心吸附柱之间没任何区别，可以随机选一个做大RNA 吸附，另一个做小RNA 吸附)。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 12000～15000g室温离心半分钟，收集管中的穿透液。大RNA 及DNA将与离心吸附柱的膜结合，小RNA 将存在于穿透液中。但由于离心吸附柱的最大吸附能力为40μg动物RNA，20μg植物RNA，如果样品中的大RNA含量高于上面数值，则穿透液中将同时含有大RNA和小RNA，在此情况下，穿透液需要再次重复上柱以去除大RNA。由于此时离心吸附柱已经吸附了大RNA，所以需要预处理(具体步骤见本手册最后的附录)。
6.在最后得到的不含大RNA的穿透液中加等体积的溶液C，混匀。此时溶液的总体积约1.5mL。
7. 先转移约0.75mL 到一新的离心吸附柱中。注意：不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA的离心吸附柱。12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 将上步上柱剩余的样品转移到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
9. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加 0.3mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。此步一般可以省略。
11. 12000～15000g室温离心半分钟以甩出残联液体。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响miRNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μLRNA 洗脱液。
13. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为miRNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

附录：
1. 将结合有大RNA和DNA的离心吸附柱中加入0.1mL自备的超纯水,12000～15000g室温离心半分钟，弃收集液。
2. 再加 0.1mL自备的超纯水，重复上步一次。
3. 将第5 步的得到、需要进一步去除其中大RNA和DNA污染的穿透液直接上柱，12000～15000g室温离心半分钟，收集穿透液(此穿透液含小RNA)。
4. 如果大 RNA 已经去干净，可以直接进入第6 步；如果大RNA 没有去除干净，则用本附录1-2的方法处理离心吸附柱，然后再将此穿透液加入(接本附录第3 步)。一般样品只需要额外处理一次就可以去除全部的大RNA污染。


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·25mM*化锰溶液(PCR级MnCl2溶液)
编号：BTN130307
英文名称：MnCl2，PCR Grade
规格：5mL
本产品为专门用于易错PCR的MnCl2水溶液，浓度为25mM，可用于调节MnCl2的最佳浓度。由于Mg2+在PCR过程中可以稳定非互补的碱基对，Mn2+能够降低聚合酶对模板的特异性，因而调整两种离子的浓度，可获得不同突变频率的多样性文库。

*化锰分子量为125.8，CAS号为7773-01-5，水合*化锰外观为玫瑰色单斜晶体；无水*化锰外观为桃红色结晶。密度为2.977g/cm3。熔点是650℃。在高于熔点温度下升华。沸点1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

·dUTP溶液，100mM
编号：BTN131038
英文名称：dUTP Solution，100mM
规格：0.4mL
dUTP(2"-脱氧-5´-三磷酸尿苷)在PCR和RT-PCR反应中替代dTTP，从而可以防止前面扩增的干扰。PCR反应中dUTP替代dTTP，导致产物中含有尿嘧啶，这种掺入适用于很多应用。将尿嘧啶-N-糖基酶 UNG(有时称为UDG)加入到PCR反应中，可切除任何污染PCR产物的尿嘧啶，从而避免假阳性的形成。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·5´末端同位素标记试剂盒
编号：BTN131036
英文名称：DNA 5´End-Labeling Kit
规格：20次
本产品为DNA 5´末端标记系统，利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和［γ-32P］ATP 对粘性末端或平末端的DNA或RNA的5´末端进行高效标记反应。原理如下：


产品特点：
1. 使用本试剂盒之前，不需要对 5´末端的磷酸基团进行去磷酸化处理，因为使用的kinase 能使5´末端的磷酸与[γ-32P]ATP的γ-磷酸进行交换。
2. 合成的单链或双寡核苷酸的5´末端游离的OH基团都能通过Kinase反应被标记(或者只是简单的磷酸化)。
3. 提供的两种反应液使交换反应和磷酸化反应都能高效进行，均能得到大于106 cpm/pmol(5´-end)的比活性。

试剂盒组份：

成分	规格
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
5×交换反应缓冲液	100μl
10×磷酸缓冲液	50μl
Control DNA	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、交换反应
1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、100%乙醇、70%乙醇等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的5´磷酸化DNA片段	14μL(≤5 pmoles的5´末端)
5×交换反应缓冲液	5μL
[γ-32P]ATP	5μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

注：5 pmoles的5´末端约等于0.17μg的长100bp的双链DNA。
3. 37℃反应30分钟。
4. 70℃加热5～10分钟使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀时使其终浓度达300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
7.离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。
注：通过第5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要完全将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*酚抽提除去蛋白质时，请在第8 步之后进行。

二、磷酸化反应标记

A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/*仿、3 M NaCl 、100%乙醇、70%乙醇、牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	133μL(≤10μg)
1M Tris-HCl，pH8.0	15μL
牛小肠碱性磷酸酶(CIAP，10～20U/μL)	2μl
灭菌的超纯水	补足到150μL

3. 50℃反应30分钟。
4. 加入150μl的TE 饱和酚/*仿/异戊醇(25：24：1)，充分混匀。
5.离心，取上层(水层)移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(最终浓度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
9.离心回收沉淀，用 1mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。

B. 磷酸化反应(前反应)
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	20.5μL(≤5 pmoles的5´末端)
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

三、合成DNA 寡核苷酸的标记
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
Oligonucleotide DNA with free 5´-OH(5～10 pmoles)	≤3μL
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

四、合成DNA 寡核苷酸的标记
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱(需另购)对于去除未掺入的dNTPs效果很好，它还能大幅减少小于20个碱基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的双链DNA的量。使用之前需要在70℃加热5～10分钟以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于10个碱基的寡核苷酸。

注意事项：
1.缓冲液可在室温融解。融解后立即置于冰中，使用前充分混匀。
2. 5×交换反应缓冲液于-20℃冻结保存时会有白色浑浊出现，但不影响反应效果。
3.酶切得到的DNA片段需经乙醇沉淀等方法纯化。
4. 当用于交换反应的DNA在5 pmoles以上(约1,000bp以上)时，标记效率有时会低于106 cpm/pmol。
5. 如果交换反应所用 DNA低于500bp时，标记效率有时会有所降低。
6. 若不进行放射线标记，仅使用本试剂盒做5´末端磷酸化反应时，反应体系中的［γ-32P］ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反应时的［γ-32P］ATP可用［γ-35S］ATP 替代。

使用举例：
按照使用方法中交换反应和合成DNA 寡核苷酸的标记的实验操作，取λ-BstP I，λ-Hpa I，λ-EcoT22 I 各3 pmols，用［γ-32 P］ATP 通过正向磷酸化反应或交换反应标记。各DNA片段的放射自显影结果如下所示：



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