平末端DNA加T试剂盒优惠价

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百奥莱博专业生产销*(代"售")平末端DNA加T试剂盒优惠价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：平末端DNA加T试剂盒优惠价
编号：BTN60106
品牌：百奥莱博
规格：50次
产地：国产|进口
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dTTP存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dT尾巴，主要用于制备T载体。其流程图如下：


产品特点：
1. 简单，2X Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA成本polymerase等酶合成的DNA片段。
3. 加T后的载体可以作为T载体使用。

产品组成：

 

成分	规格
Taq DNA olymerase(5U/μL)	50μl
2×dT Tailing Buffer	1.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：反应前纯化处理：
平末端DNA片段或平末端质粒DNA可以采取胶回收和酚/*仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1μg/μL为宜。必须注意的是，用Vent，Deep Vent，Pfu，Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/*仿抽提或Proteinase K处理)，否则它们将在加T反应时，切除掉加上的T尾巴，干扰反应。
二：加T反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中，分别加入下列成分：

回收的DNA片段	0.2-2μg
2×dT Tailing Buffer	25μL
Taq DNA polymerase(5U/μL)	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时

三：反应后处理
加T反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/*仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/*仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于后续连接反应。

想要了解更多关于平末端DNA加T试剂盒优惠价的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：

·GTP溶液(100mM)
编号：BTN120628
英文名称：GTP Solution，100mM
规格：0.25mL
本产品纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于体外RNA转录合成。

GTP分子式为C10H13N5O14P3Na3，分子量是589.2，消光系数为13.7×103M-1 ×cm-1(pH7.0)，λmax为253nm。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·真菌RNA提取试剂盒
编号：BTN60305
英文名称：Fungal large-scale extraction kit
规格：50次
本试剂盒专门用于从常见的各种真菌和革兰氏阳性细菌中快速提取总RNA，提取过的真菌包括Candida albican，Saccharomyces cerevisiae，Schizosaccharomyces pombe和Pichia pastoris、Aspergillus flavus等。

试剂盒特点：
1. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
2. RNA产量高，一般在20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0×107个细胞)
3. 操作简单，整个过程只需要约30分钟。
4. 最大处理量为10mL 酵母。
5. 固体培养基上的真菌菌落也可以直接用于提取。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	20ml
溶液B	25ml
溶液C	50ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mg左右的干菌丝(或100mg左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落或革兰氏阳性细菌)转移到1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1-10mL液体真菌在1.5mL塑料离心管中12000～15000g离心 1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.4mL溶液A并充分吹打混匀。如果A溶液存放时产生沉淀，请置于65℃融化，用前充分摇晃均匀。
3. 加入0.4mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。
5.室温 12000～15000g离心3～5分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中.
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自备*仿，振荡混匀30秒。
7.室温 12000～15000g离心3～5分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
8. 加入两倍体积(约0.8-1mL)的溶液C，充分混匀。
9.室温 12000～15000g离心离心3-10分钟，RNA 将在管底形成沉淀，小心弃上清。
10. 加自备的75%乙醇，振荡器上振荡混均30秒。
11.室温 12000～15000g离心1分钟。
12.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
13. 重复 75%乙醇洗涤步骤一次。
14. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液(约50μL)。
15. 短暂放1-2分钟后加入100μl左右的RNA-free 水使RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃长期保存。
16. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9:558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用。尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
17. RNA产量产率测定：
 将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%。
18. RNA 纯度测定：
 无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。

疑难解答：
Q：为何从酵母中提取的总RNA 有3 条小带？
A：它们分别是70bp左右的tRNA，120bp左右的5 S RNA，160bp左右的5.8 S RNA。
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA/变性。使用百奥莱博优化的上样变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA
在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。


平末端DNA加T试剂盒优惠价关键词：BTN60106,dT Tailing Kit,平末端DNA加T试剂盒

2-*-4-硝基*(代"*")-α-L-岩藻糖苷 Boc-L-valine 157843-41-9
F020234 山羊抗人γ链抗体 Goat Anti-Human IgG(γ chain)
NHS活化琼脂糖凝胶4FF Vitamin A acetate
PY04-082  吖啶黄素  1.5mg/支×10支  每支添加于100mlEB增菌液培养基基础中，用于单增李斯特氏菌的增菌培养
F030813 BIOTIN标记兔抗小鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Mouse IgG*BIOTIN
BL1301 Puc19
BTN131022 碱性磷酸酶标记链霉亲和素 Streptavidin,AP Conjugated
无机磷检测试剂盒(紫外分光光度微板法)   100T
95-54-*(代"5") 邻*二胺(OPD)
6025-53-2 玉米素核苷
SJ0314 Gumacabic powder 阿拉伯树胶粉
1%甲**(代"胺")蓝水溶液   100ml
9006-59-1 Albumin  Egg   卵清蛋白
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·牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)
编号：BTN120404
英文名称：Alkaline Phosphatase,Calf Intestinal
规格：500U
牛小肠碱性磷酸酶与E.coli来源的碱性磷酸酶相同，催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解，对ATP等的焦磷酸键水解速度较慢。由于CIAP处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5´磷酸末端，因此它们不能进行自连接。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。

产品用途：
1．去除载体DNA片段的5´-末端的磷酸基；
2．防止克隆载体的自连接；
3．蛋白质丝*酸、苏*酸和酪*酸的去磷酸化；
4．为5´末端标记准备模板。

产品组成：

成份	规格
CIAP(10～30U/μl)	500U
10×CIAP Buffer	0.5mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：在37℃、pH9.8的条件下，1分钟内水解对硝基*(代"*")磷酸盐生成1μmol的对硝基*(代"*")酚所需要的酶量定义为1个活性单位。

纯度：
1．30 U的本酶和1μg的λDNA-Hind III片段在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2．30 U的本酶和1μg的Closed circular(RFI)pBR322 DNA在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3．18 U的本酶和1μg的16S，23S rRNA在37℃下反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

使用举例：
1．在微量离心管中配制50μL反应体系：

成分	加入量
DNA Fragment in TE Buffer	1～20pmol
10×CIAP Buffer	5μl
CIAP(10～30units/μl)	1-2μl
补水到	50μl

2．37℃或50℃反应30分钟。或者先37℃反应15分钟，再50℃反应15分钟。注意：单链DNA和具有5´突出末端的DNA在较低温度下(如37℃)即可去磷酸化，而具有3´突出末端的DNA或平末端DNA需要较高温度(如50℃)才能去磷酸化。
3．*酚/*仿/异戊醇(25:24:1)抽提2次。注意：如果早在*酚抽提之前，用自备的蛋白酶K降解CIAP酶，则效果更好。具体做法是：加入EDTA和SDS使其终浓度为5mM EDTA和0.5% SDS，最后加入蛋白酶K溶液，使其终浓度为50μg/mL，然后56℃处理30分钟，再75℃孵育10分钟。然后用于*酚/*仿/异戊醇抽提。
4．*仿/异戊醇(24:1)抽提1次。
5．添加2.5μl的3M NaCl(终浓度150mM)。
6．添加125μl的(2.5倍量)冷乙醇，在-20℃下放置30～60分钟。
7．13000g离心20分钟后，小心去上清。
8．用1mL 75%乙醇洗涤一次。
9．干甩数秒，小心吸弃上清。
10．用20μl以下的TE Buffer溶解DNA沉淀待用或放-20℃长期放置。

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