北京现货DNA粘转平试剂盒(国产,进口)

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百奥莱博专业生产供应北京现货DNA粘转平试剂盒(国产,进口)，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京现货DNA粘转平试剂盒(国产,进口)
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：20次
英文名：DNA Polishing Kit
本产品利用Pfu DNA polymerase所具有3´到5´的聚合酶活性和5´到3´外切酶活性，将3´或5´突出的DNA片段转化成平末端，用于克隆工作。

产品特点：
1. 简单，精心优化过的2×Polishing Buffer中含有所需要的所有成分，不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA载体。

产品组成：

 

成分	规格
Pfu DNA Polymerase(3U/μL)	20μl
2×Polishing Buffer	0.5ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

使用方法：

1. DNA片段的准备：
无论是来源Taq，Tth,T7，Klenow和Vent等DNA聚合酶合成的DNA片段，还是用限制性内切酶制备的DNA片段，粘转平之前均需要将DNA沉淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀DNA的方法包括经典的盐/纯沉淀法，离心柱DNA 吸附法和百奥莱博的一管式非醇超快DNA沉淀法。
2. 设置粘转平(Polishing)反应：

在一个干净的离心管中，分别加入
3´或5´突出的DNA片段	10-500ng
2×Polishing Buffer	25μL
Pfu DNA polymerase	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时。

注意：如果不使用热盖式PCR 仪器加热，则需要在反应管中再加入适量液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。
3.反应后处理
粘转平反应后，样品可以放-20℃长期保存，也可以直接用于T4 DNA连接酶催化的连接反应。对10μL的连接反应体系，一般需要加入1-2μL粘转平反应液。由于Pfu DNA polymerase在连接反应的温度条件下几乎没有活性，所以不必去除。但文献报道，去除后连接效率更高。

更多有关北京现货DNA粘转平试剂盒(国产,进口)的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·全长Bst DNA聚合酶
编号：BTN130612
英文名称：Bst DNA Polymerase, Full Length
规格：500U
全长的Bst DNA聚合酶来源于Bacillus stearothermophilus，它具有5´→3´聚合酶活性和双链特异的5´→3´核酸外切酶活性，但缺失3´→5´核酸外切酶活性。

产品特点：
1. DNA等温扩增。
2.引物延伸。
3. 80℃ 20分钟即可失活。
4. 建议反应温度不要超过70℃，不能用于热循环测序或PCR。

产品组成：

成分	规格
Bst DNA聚合酶，全长(5U/μL)	100μl
10×反应Buffer	1.5ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。长期贮存需补加100μg/mL BSA或0.1% Triton X-100。

1×反应Buffer的组成：20mM Tris-HCl(pH8.8 @ 25 ℃)，10mM KCl，10mM(NH4)2SO4，2mM MgSO4，0.1% Triton X-100。

活性定义及检测条件：1U指 65℃条件下，30分钟内使 10nmoL的dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。活性检测条件为：50mM KCl，20mM Tris-HCl(pH8.8),10mM MgCl2，30 nM M13mp18 ssDNA，70 nM M13 测序引物(-47)24 mer，200μm dATP，200μm dCTP,200μm dGTP，100μm[3H] dTTP，100μg/mL BSA和酶，65℃温育。

贮存条件：50mM KCl，10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.1% Triton X-100和50%甘油，贮存于-20℃。


北京现货DNA粘转平试剂盒(国产,进口)关键词：BTN60107,DNA粘转平试剂盒,DNA Polishing Kit


·GTP溶液(100mM)
编号：BTN120628
英文名称：GTP Solution，100mM
规格：0.25mL
本产品纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于体外RNA转录合成。

GTP分子式为C10H13N5O14P3Na3，分子量是589.2，消光系数为13.7×103M-1 ×cm-1(pH7.0)，λmax为253nm。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·酿酒酵母Y187感受态细胞
编号：BTN140389
英文名称：E.coli Y187 Rosetta Competent Cell
规格：10×100μL
 Y187菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母单杂，双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGold，AH109等)通过mating 操作进行筛库试验。Transformation marker 为: trp1，leu2，报告基因为：lacZ，MEL1。Y187-GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1～ 174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端768～881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4 系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N 端1～174 位*基酸区段的DNA 结合域(DNA-BD)和位于C端768～881 位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD 单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD 不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD 融合，形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果 bait和prey发生相互作用，就会促使 BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y187 有两个报告基因：lacZ，MEL1，分别由两种不同的启动子(G1，M1)启动，这两种启动子只有GAL4 识别的17bp 核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。

 Y187感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株，本产品经特殊工艺制作而成，经PGADT7质粒检测转化效率为104 cfu/μg DNA。

菌株基因型：MATα，ura3-52，his3-200，ade 2-101，trp 1-901，leu 2-3，112，gal4Δ，met–,gal80Δ，URA3: :GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ，MEL1

产品组成：

成分	规格
Y187感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7(control vector)，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/liAC、PGADT7质粒4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入预冷的目的质粒2-5μg，CarrierDNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)10μL，PEG/LiAc 500μL，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μL ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取 50μL ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。


北京现货DNA粘转平试剂盒(国产,进口)关键词：BTN60107,DNA粘转平试剂盒,DNA Polishing Kit

FMOC-L-丙*酸 D-Proline 35661-39-3
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ARB10402 人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)elisa测定使用说明书 Human soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,strail ELISA KIT
*甲*(代"酚")绿* Maltose monohydrate 62625-32-5
甲**(代"胺")蓝染色液(0.5%,硼*(代"酸")盐法)   100ml
F030702 BIOTIN标记小鼠抗乙肝e抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBeAg*BIOTIN
麦芽磷酸化酶 Stigmasterol 9030-19-7
对称二*基偶氮羰酰肼 HEEDTA 538-62-5
ARB13016 小鼠吡*(代"啶")交联物(PY)定量分析 Mouse pyridinium crosslink/pyrilinks,py ELISA KIT

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