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- 详细信息
- 文献和实验
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- 库存:
941
- 英文名:
Coomassie Blue G-250 Stain Solution
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")考马斯亮蓝G-250染液促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:考马斯亮蓝G-250染液促销
编号:BTN80812
规格:250mL
英文名:Coomassie Blue G-250 Stain Solution
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
考马斯亮蓝G250是最经典的SDS-PAGE染色方法,本产品就是基于此方法而开发的产品。
产品特点:
1.即开即用,不需要自己单独准备所有溶液。
2.不需昂贵仪器,肉眼即可观察结果,不象其他纳克级的染色方法需要贵重的仪器设备(如SYPRO 系列的高灵敏度的荧光染料需要荧光成像系统)。
3.与普通扫描仪等兼容,便于保存数据和后续处理。
4.灵敏度略高于考马斯亮蓝R250染色液。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 250ml |
| 溶液B | 250ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
1.按常规方法进行蛋白电泳。
2.凝胶电泳停止后,切除浓缩胶,转移分离胶至染色容器中。
3.倒入30-40mL溶液A,对1mm厚的PAGE胶,摇床上缓慢震荡至少10-15分钟。对1.5mm厚的PAGE胶,摇床上缓慢震荡至少2-3小时。
4.弃掉溶液A,再加入15-20mL溶液B。对1mm 厚的PAGE胶,摇床上缓慢震荡至少30-60分钟。对1.5 mm 厚的PAGE胶,摇床上缓慢震荡至少2-3小时。
5.弃掉溶液B,再加入30-40mL自备的10%的乙酸,缓慢摇动,直到在清晰的背景上出现亮蓝色的蛋白条带。一般需要1-2小时。
6.扫描或直接照相,留下实验记录。
想要了解更多关于考马斯亮蓝G-250染液促销的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
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考马斯亮蓝G-250染液促销关键词:考马斯亮蓝G-250染液,Coomassie Blue G-250 Stain Solution,BTN80812
·终点显色法内毒素定量试剂盒
编号:BTN120415
英文名称:Chromogenic End-point TAL Kit
规格:32次
鲎试剂为鲎科动物东方鲎(TAL)的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有C因子等跟凝血有关成分,当细菌内毒素激活C因子时会,起一系列酶促反应,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的显色基质,使其分解为多肽和黄色的对硝基*(代"*")胺(pNA,λmax=405nm)。在一定时间内,pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关,据此,可以通过测定样品405nm的光吸收来用外标准法定量样品的内毒素浓度。其原理图如下(TAL和图中LAL相同):
本试剂盒就是基于上述原理开发而成,并进行了重大改进,增加了偶氮化试剂染色硝基*(代"*")胺(pNA)的步骤,此步使得反应的最终颜色变成玫瑰红色(λmax = 545nm),避免了深颜色样品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰,结果更加准确可靠。
产品特点:
1.一站式,提供所需的试剂、内毒素对照和无热源的耗材,为用户省去繁琐的准备工作。
2. 灵敏度高,可以对浓度在0.1EU/mL-1EU/mL和在0.01EU/mL -0.1EU/mL两个浓度范围的内毒素样品进行定量。
3. 比经典的pNA法多一步偶氮化染色的步骤,处理样品的范围更广,结果更加稳定可靠。
4.样品中如含有β-葡聚糖,则需选用特异性显色基质鲎试剂盒,因为β-葡聚糖会产生G因子旁路反应,干扰内毒素检测。
5. 若样品含头孢类抗菌素或磺胺制剂,则需要选用不含偶氮化试剂的鲎试剂盒,因为上述成分也能跟本试剂盒中的偶氮染色剂发生偶联反应而干扰偶氮化显色。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 细菌内毒素标准品 15EU | 2支 |
| 鲎试剂 | 2支×1.7mL |
| 显色基质 | 2支×1.7mL |
| 偶氮化试剂1 | 2支×10mL |
| 偶氮化试剂2 | 2支×10mL |
| 偶氮化试剂3 | 2支×10mL |
| HCl(反应终止剂) | 50ml |
| 细菌内毒素检查用水 | 50ml×2瓶 |
| 除热原试管,10×75mm | 10×5支 |
| 除热原吸头,1ml | 10×4支 |
| 除热原吸头,0.2ml | 10×5支 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃避光保存,有效期两年。
使用方法:
一、样品的预处理
1.若样品的本底在545nm的吸光度值大于0.5,必须对样品进行稀释后再检测。
2.若样品颜色较深(例如溶血),或在酸性条件下颜色加深(例如一些组织培养介质),必须设置样品空白管以扣除样品自身的颜色本底。样品空白管不加入鲎试剂,以等体积的细菌内毒素检查用水代替。其余操作同样品管。
3.本检测方法高度灵敏,故接触试剂及样品的所有器皿必须是除热原的。除热原指内毒素浓度小于0.005 EU/ml。玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。实验过程应防止细菌的污染(内毒素即细菌的LPS)。
4.待测样品的pH值应在6.0–8.0之间,若超出此范围,需用自备的除热原的缓冲液、0.1M*氧化*或0.1M盐*(代"酸")调节。
二、试剂准备
5.细菌内毒素标准溶液配制(制备标准曲线用):取细菌内毒素标准品1支,按细菌内毒素标准品使用说明(见附2)稀释为10EU/mL的内毒素溶液,再稀释为1.0EU/mL的内毒素溶液,最后按下表以1.0EU/mL的内毒素溶液为母液,在A-D四个离心管中稀释成0.1、0.25、0.5、1.0 EU/mL的浓度梯度。配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。注意:也可以选择0.01、0.025、0.05、0.1EU/mL的浓度梯度。注意:标准品浓度范围不同,后续显色实验的保温时间也不同。
| 成份 | A管 | B管 | C管 | D管 |
| 细菌内毒素检查用水(mL) | 0 | 0.5 | 0.75 | 0.9 |
| 1EU/ml内毒素溶液(mL) | 1 | 0.5 | 0.25 | 0.1 |
| 内毒素浓度(EU/mL) | 1 | 0.5 | 0.25 | 0.1 |
6.阴性对照用细菌内毒素检查用水。
7.配制鲎试剂、显色基质、偶氮化试剂等试剂的工作液。
(1)鲎试剂:按标签标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中,轻轻振摇使鲎试剂完全溶解,得鲎试剂工作液。注意不要用旋涡混匀剧烈振摇。鲎试剂工作液应在10分钟内用完。
(2)显色基质:按标签标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中,轻轻振摇使显色基质完全溶解,得显色基质工作液。显色基质工作液可在无污染的条件下于4℃贮存8小时以内。
(3)偶氮化试剂1:按标签标示量加反应终止剂(注意:不是细菌内毒素检查用水)于偶氮化试剂1瓶中,得偶氮化试剂1工作液。
(4)偶氮化试剂2:按标签标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂2瓶中,得偶氮化试剂2工作液。
(5)偶氮化试剂3:按标签标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂3瓶中,得偶氮化试剂3工作液。偶氮化试剂工作液可于4℃贮存1周。
三、实验操作
8.取本试剂盒提供的无热原试管6管,按下表操作(每加一个试剂均需要充分混匀,或用移液器轻柔吹打混匀):NC为阴性对照,PC为阳性对照。
| 成份 | NC 1管 | PC 4管 | 样品 1管 |
| 细菌内毒素检查用水(μL) | 100 | - | - |
| 内毒素标准溶液(μL)(4种) | - | 每种分别100 | - |
| 待测样品(μL) | - | - | 100 |
| 鲎试剂工作液(μL) | 100 | 100 | 100 |
| 混匀,37ºC温育T1分钟 | |||
| 显色基质溶液(μL) | 100 | 100 | 100 |
| 混匀,37ºC温育T2分钟 | |||
| 偶氮化试剂1工作液(μL) | 500 | 500 | 500 |
| 偶氮化试剂2工作液(μL) | 500 | 500 | 500 |
| 偶氮化试剂3工作液(μL) | 500 | 500 | 500 |
| 混匀,静置5分钟,于λ545nm测OD值 | |||
特别注意:每个批次的T1和T2不同。对本批次。
四、数据处理
9.建标准曲线:Y=bX + a,其中Y为545nm处吸光值,X为内毒素浓度,b为直线斜率,a为Y轴截距。
10.当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效:
(1)标准曲线的相关系数r≥0.980,
(2)标准曲线最低点的Y值大于阴性对照的Y值,
(3)待测样品平行管的平均值在标准曲线的区间内。
附1:待测样品的干扰实验
当样品中可能存在鲎实验的干扰物质时,须进行干扰实验。待测样品的干扰实验详见《中华人民共和国药典》2010细菌内毒素检查法》的“光度测定法干扰实验”。当鲎试剂、待测样品的来源、配方、生产工艺改变或实验环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时,须进行干扰实验,步骤如下:
1.选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度(设为λm),作为待测样品干扰实验中添加的内毒素浓度,配制含λm内毒素的待测样品阳性对照,测量出该溶液的内毒素浓度,称为Cs;
2.测量出未添加外源内毒素的待测样品溶液内毒素浓度,称为Ct;
3.计算该实验条件下的回收率R=(Cs–Ct)/λm×100%
4.当R在50%~200%之间,则认为在此实验条件下待测样品溶液不存在干扰作用。
5.当R在50%~200%之外,需对待测样品进行系列稀释(稀释倍数不得超过最大有效 稀释倍数MVD)或进行其它处理消除干扰,每一稀释溶液都重复步骤1-3,直到内毒素的回收率R在50%~200%之间。选择回收率R最接近100%的稀释倍数进行内毒素检测。
附2:细菌内毒素标准品使用说明
本品为白色疏松海绵状固体,系参照中国药品生物制品检定所的细菌内毒素工作标准品标定的大肠杆菌内毒素冻干品,供鲎实验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰实验和各种阳性对照。其用法如下:
6.溶解:加入适量的细菌内毒素检查用水(BET水,最大加入量不得超过1mL),复溶后置涡旋混匀器上混匀15 min。
7.稀释:将上述内毒素溶液进一步用细菌内毒素检查用水稀释成各个不同浓度。每次稀释后必须在涡旋混匀器上混匀至少一分钟。每一步的稀释倍数均不得超过10倍。
8.本品为一次性使用。仅供体外鲎实验检测,禁止用于注射、口服等。
9.实验所用的器皿需经过处理,以除去可能存在的外源性内毒素,可以经250℃干烤至少60分钟处理,也可以采用其他确保不干扰细菌内毒素检测的适宜方法处理。实验操作过程中应该防止微生物的污染。
10.稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟,用前需要在涡旋混匀器上剧烈混匀1分钟,放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。
考马斯亮蓝G-250染液促销关键词:考马斯亮蓝G-250染液,Coomassie Blue G-250 Stain Solution,BTN80812
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我公司生产供应销*(代"售")的蛋白质研究产品正全系列现货促销,满分期待您的垂询选购考马斯亮蓝G-250染液促销。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验一、目的 学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。二、原理 考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白
一般R250 染蛋白,G250 一般测蛋白浓度,也可染胶,敏感性更高但较慢脱色较难。 G250常用的蛋白染料,作定性试验用,染色后为蓝绿色;R250较敏感,,做定量实验用,染胶效果较好.染色后为红蓝色 考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)。C45H44O7H3S2Na,MW=824,λmax
一、原理:考马斯亮蓝G—250法于1976年由Bradform建立。考马斯亮蓝G—250具有红色和蓝色两种色调,在酸性溶液中,其以游离态存在呈棕红色,当它与蛋白质通过疏水作用结合后,变为蓝色。色素对可见光谱的最大吸收值从465nm转移到595nm处。蛋白质和色素的结合反应很快速,约在2分钟左右的时间内达到平衡,在室温1小时之内是稳定的。在0.01一1.0mg蛋白质/m1范围内,蛋白质含量与A 595值呈正比。二、染液配制: 100mg的考马斯克蓝G—250溶解于50m1 95%的乙醇中,加入
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