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- 2025年07月11日
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文献和实验我的石蜡切片又「团灭」了！没关系，专业技术人员与您并肩推塔！
最近，接到前线战报，上海生科院 320 大院的马同学正在使用 CST 的 PD-L2 抗体（#82723）在多种人组织上进行免疫组化实验。然而，多次实验均无法得到结果，切片上的细胞「团灭」而归。CST 技术人员闻悉后，决定进行实地探访，与科研人员一起，找到问题所在。前期准备在经过前期与马同学的讨论后，决定在这次测试中，对原 protocol 进行如下重大调整：1. 测试时增加阳性/阴性对照片（Control slides：SignalSlide® PD-L1 IHC Controls
一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化，不同点如下： 1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其相同。 2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油：0.01M PBS （1：1）。条件许可，建议购买抗淬灭的封片液，使标本可以保存更久。 5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。 6、荧光抗体染色假阳性可能会多，需要分别设定阳性和阴性
我做的是大鼠肾脏 MMP-9 和 PAI-1 的免疫组化染色。MMP-9 为山羊抗鼠的，PAI-1 为兔抗鼠的，均为中山公司产品。选用中山公司相应的二抗试剂盒。反复做了好几批片子可结果总是不尽如人意，背景颜色比较深，难以判断阳性结果。 具体步骤如下： 1、石蜡包埋组织切片 4μm，用的是中山公司的多聚赖氨酸防脱片的玻片，捞片后置 60℃ 烤箱烤片 2-4 小时。 2、半月后，脱蜡水化 3、PBS 液冲洗，3 分钟×3； 4、切片置于 1％triton-x-100
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