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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
734
- 英文名:
RNA sample efficient preservation solution
- 保质期:
24个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
15~25℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括RNA样品高效保存液 RNA纯化在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:RNA样品高效保存液 RNA纯化
编号:RFT033
英文名:RNA sample efficient preservation solution
产地:国产|进口
规格:100ml
本试剂是一种无毒的可直接使用的样品储存液,能使细胞内的RNA与RNA酶分离,可以快速可靠地保存动物组织、细胞内的RNA。组织获取后立即浸入保存液中,在室温可以保存7天,4℃可以保存4周,-20℃、-80℃标本可以长期保存,RNA稳定存在不降解,取出后用各类方法抽提可以获得高质量的RNA。
操作步骤:
1、根据要保存的各样本的体积,计算出所需保存液用量。保存液的用量应当是组织体积的10倍(100mg组织约用1ml保存液);离心收集2×107细胞保存液的用量是1ml。加入保存液的原则是:量宁多勿少。
建议在实际操作中不要称量组织,而直接根据目测结果加入保存液量,以加快操作和减少污染。例如5mm边长的立方体组织块,体积为125mm3=125μl,故应当加入1.25ml的保存液液。
2、将保存液按需要量分装入自备保存管中;
3、快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,较小的组织直接取下,立即完全浸入保存液中。
注:组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则保存液不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较大的组织可以切成厚度<0.5 cm的任意片状后保存,较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)则可以直接浸入保存液。
4、保存时先将样本浸入保存液后置4℃冰箱过夜(注:4℃过夜是必需的,这样可使保存液完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(保存液在-20℃时可能为液态,也可能为固态,如有结晶析出,也是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,直接转移到-80℃冰箱。在保存液中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1、组织和细胞取材速度要快,在获取后应当尽快浸入保存液,以防止RNA降解。
2、冰冻组织不能用保存液保存,因为保存液不能有效渗入冰冻组织。
3、保存样品的RNA提取:样本从-20℃或-80℃冰箱取出后,复温到室温后,取出组织块,再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞,去除保存液,再用于提取RNA。后继的处理(如组织匀浆)可以在室温下进行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保护。残留少量保存液保存液不影响后继提取RNA的质量。
4、保存液在动物组织(如大鼠肝脏,脾脏)和细胞(如DH5α)RNA的保护中效果不错;植物材料种类繁多,没能一一测试(烟草和拟南芥叶片中的RNA能被保存液有效保护),建议预实验后再使用。
储存条件:15~25℃,有效期24个月。
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RNA样品高效保存液 RNA纯化关键词:RFT033,RNA sample efficient preservation solution,RNA样品高效保存液
·Long Taq DNA聚合酶
编号:RFT098
英文名称:Long Taq DNA Polymerase
规格:500U|5×500U
本品是由pfu DNA 聚合酶和Taq DNA聚合酶按照一定的比例混合而成。两种酶协同作用实现了扩增效率、合成速度和延伸性能的完美统一,可以合成超长的DNA片段。当扩增具有复杂的二级结构(GC rich等)的模板或具有重复序列的模板时,使用GC buffer进行PCR扩增将非常有效。另外,此酶具有比Taq DNA聚合酶约5倍的PCR可信度。该酶的大多数PCR产物3’端带碱基A,可以通过TA克隆法进行克隆。
产品组分:
Long Taq DNA Polymerase(5U/μl)————————100μl
2×GC buffer(含Mg2+)—————————————1ml
活性定义:1单位(U) Long Taq DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
贮存液:50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol
使用方法;
1. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:
| 成分 | 体积 | 终浓度 |
| Template | 0.1-1μg | as you wish |
| Primer 1(10μM) | 1μl | 200nM |
| Primer 2(10μM) | 1μl | 200nM |
| 2×GC buffer | 25μl | 1× |
| dNTP Mixture(10 mM) | 1μl | 200μM each |
| Long Taq (5 U/μl) | 0.5-1μl | 2.5-5U |
| ddH2O | up to 50μl | - |
2. 混匀后,离心快甩将反应液收集到管底。
3. PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。
4. PCR仪上执行以下程序:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 初始变性 | 94℃ | 1-5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30 sec | 25-40* |
| 退火 | Tm-5℃* | 30 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 1 min/kb | |
| 最后延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
注:PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
储存条件:-20℃,有效期一年。
RNA样品高效保存液 RNA纯化关键词:RFT033,RNA sample efficient preservation solution,RNA样品高效保存液
·即用型PMSF溶液(100mM)
编号:RFT193
英文名称:Phenylmethanesulfonyl fluoride
规格:10ml
PMSF是一种不可逆的丝*酸蛋白酶抑制剂,如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶等,作用原理是特异性识别并磺化决定酶活性的丝*酸残基活性位点。此外,其对半胱*酸蛋白酶(如木瓜蛋白酶)和哺乳动物来源的乙酰胆碱酯酶也有抑制效果。PMSF常在细胞或组织裂解之前加入到裂解液中以预防蛋白的降解。PMSF可以单独使用,也常与其他蛋白酶抑制剂如胃抑肽酶A或者磷酸酶抑制剂如正钒酸*混合使用。
本产品配备有PMSF溶解液,可以方便配制成100mMPMSF储备液。由于PMSF不溶于水,有毒性,不稳定的缺点,另有PMSF的无毒替代物,AEBSF(货号:AE1020),活性和功能与PMSF相同,具有毒性低,稳定,溶于水的优点。在蛋白提取中,PMSF推荐使用终浓度为0.1-1 mM,由于PMSF在水系缓冲液中极其不稳定,必须现用现加。
配制使用方法:
取一管PMSF晶体全部加入到PMSF溶解液中,彻底溶解后即配成100mMPMSF溶液。在蛋白提取缓冲液中稀释100倍使用,如500μl提取缓冲液中加入5μl。
注:PMSF溶液在水系缓冲液中极其不稳定,必须现用现加。
储存条件:-20℃,有效期6个月。
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