北京细菌RNA提取试剂盒厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应北京细菌RNA提取试剂盒厂家，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京细菌RNA提取试剂盒厂家
产地：国产|进口
英文名：Bacterial RNA extraction kit
编号：BTN51102
规格：100次
本试剂盒是在动物RNA提取试剂盒基础上根据细菌提取的具体情况改良而得。它基于异硫*酸胍/酚/*仿提取RNA原理，可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各种常见的革氏阴性细菌。如果需要提革氏阳性细菌(如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等)的RNA，可以选择真菌RNA提取试剂盒。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，只要十分钟左右,可以全在室温下进行。
2. 所得 RNA 质量高,OD260/OD280一般在 1.9，不含基因 DNA污染。
3. 灵敏度高，可以从一个菌落中提取到普通电泳能够检测到的总 RNA。
4. 性价比高于进口同类产品。

试剂盒组成：

 

成分	规格
细菌RNA提取试剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌(注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜细菌)，吸尽液体培养基，加入1mL细菌RNA提取试剂盒并用枪充分吹打，确保细菌全部裂解，没有块状物。
 如果使用菌落，则用接种环小心将其转移到装有1mL细菌RNA提取试剂盒的1.5 m塑料离心管中，用移液枪吹打均匀。在细菌数较少时，建议使 用助沉剂 RNApp以提高 RNA 回收率。
2. 加入0.2mL *仿，在振荡器上充分振荡混均 30秒(必须将管底的液体振荡起来，否则不能有效将DNA 打断和去除蛋白质)。
3. 12000～15000g室温离心3分钟。上清液无色，下层液呈篮色，中间为蛋白质。小心将上清液转移到另一干净 1.5ml塑料离心管中，上清液体积约为0.6mL。为避免触及中间层的DNA和蛋白质，建议分小量多次 吸取，并且只取 0.5mL，留 0.1mL左右。当细菌数量较少时，中间层十分松散，上清时很容易吸到下层有机相，需要更加小心。
4.在上清液中加入等体积的异丙醇，振荡器上振荡混均 30秒。
5. 12000～15000室温离心 3-10分钟，RNA 将在管底侧面形成沉淀。
6.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
7.在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均 30秒。
8. 12000～15000g室温离心 1分钟。
9.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
10. 重复第 8 到第 10 步一次。
11. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液(约50μl)。
12. 短暂放 1-2分钟后加入适量 RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃长期保存。
13. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通 DNA上样液不含变性剂，也没经过去 RNase处理，所以最好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
 由于细菌细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由23S(约3700nt)，16S(约1700nt)和5S(约100nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合 EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以23S rRNA条带的荧光强度一般比16S rRNA条带的荧光强度强2倍。如果这两条rRNA 带不清晰或比例小于此范围则表示 RNA 有降解(因为大的RNA 被酶降解的可能更大)。
14. RNA产量产率测定：
 将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量和产率。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280，否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%，因为核酸光吸收跟溶液 pH相关，而 DEPC 水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸，使溶液 pH降低进而降低 RNA的光吸收。
15. RNA 纯度测定：
 无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNAScavenger和PS Scavenger去除。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加 RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

北京细菌RNA提取试剂盒厂家正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·质谱兼容型蛋白银染试剂盒
编号：BTN100811
英文名称：MS-Comp*(代"a")tible Silver Stain for Protein
规格：10次
银染是目前检测PAGE电泳分离后的蛋白质的最灵敏的方法，MS(质谱)是确定未知蛋白最常用和最快捷的方法，但将银染得到的蛋白直接用于MS分析有很多问题，其中最主要问题是常规银染所使用的试剂(包括强氧化剂和醛类)容易使蛋白质发生化学修饰，这样MS分析得到的*基酸信息跟蛋白质实际的*基酸信息并不相同。为了使银染得到的蛋白质可以用于MS分析，为此本公司开发MS 兼容型银染试剂盒。

产品特点：
1．跟MS 兼容，原理是避免使用能化学修饰蛋白质的试剂，所得蛋白质没有发生化学修饰，故可直接用于后续的MS(包括MALDI-TOF-MS和ESI-MS)分析。
2．银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍左右，可达0.2-0.6ng蛋白质/条带。
3．可用于各种PAGE胶，包括变性PAGE胶(如SDS-PAGE，尿素-PAGE)，非变性PAGE胶，IEF胶(等电电泳胶)，2D胶等。
4．四种溶液都是现用现配，实验结果的可重复性好。

产品组成：

成分	规格
溶液A组分一干粉	1份
溶液A组分一溶剂	100ml
溶液A组分二干粉	10份
溶液B干粉	5g
溶液C组分一干粉	10份
溶液C组分二	2ml
溶液D干粉	10份
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

准备工作：
所有溶液均需现配现用。以下按一块PAGE胶需要200mL溶液配制，用户可以根据自己PAGE胶的大小增减溶液的用量。
一、用自备试剂配制400mL固定液(按一次银染需要固定2次计算，每次固定需200mL固定液)
将160mL甲醇、40mL乙酸和200mL去离子水充分混合后即得400mL固定液。
二、配制200mL溶液A
先配制溶液A组分一储备液：将溶液A组分一干粉加入到100mL溶液A组分一溶剂中，充分摇晃溶解即得溶液A组分一储备液。此溶液可以4℃保存。将60mL甲醇、8mL溶液A组分一储备液、1 份溶液A组分二(干粉)和132mL 去离子水充分混合后即得200mL溶液A。
三、配制200mL溶液B
称0.5g溶液B干粉，溶于200mL 去离子水中，充分混合后即得200mL溶液B。
四、配制200mL溶液C
将1 份溶液C(干粉)溶解在200mL 去离子水中(干粉不容易溶解，需搅拌)即得溶液C。注意：使用前还需要再加入160μL溶液C组分二并充分混匀。
五、配制200mL溶液D
将1 份溶液D(干粉)溶解在200mL 去离子水中即得溶液D。

银染：
1．PAGE电泳(包括非变性PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE等)结束后，将PAGE胶转移到装有200mL 固定液的瓷盘或玻璃盘中，摇晃30分钟以去除干扰银染的组分(如甘*酸、SDS、尿素、DTT、甘油等)，倒掉固定液。注：此步很重要，否则银染背景很高。
2．重复上步一次。
3．将PAGE胶转移到200mL溶液A中，室温摇晃30分钟。
4．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。
5．将PAGE胶转移到200mL的溶液B中，室温摇晃20分钟。
6．用200mL 去离子水漂洗2次，每次1分钟(不要延长或缩短)。
7．将PAGE胶转移到200mL的溶液C中，室温摇晃直到蛋白电泳条带显现(一般需要10分钟左右)。
8．将PAGE胶转移到200mL的溶液D中，室温摇晃终止反应。
9．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。
10．切下条带或胶块进行后续的脱银，原位trypsin酶解，多肽沉淀和MS分析(略)。

技术资料：
MS前处理步骤(仅供参考)
1．脱银：将切下的银染斑点或条带用脱银液(30mM K3Fe(CN)3和100mM Na2S2O3的1：1的混合液)处理直到黑色消失。
2．还原：将胶块或胶条置于10mM DTT(溶剂为50mM NH4HCO3)，56℃处理一小时。
3．烷化：将胶块或胶条置于55mM 碘乙酰胺(溶剂为50mM NH4HCO3)，室温避光处理45分钟。
4．原位trypsin酶解：将胶块或胶条置于10 ng/uL 测序级别的trypsin溶液中(溶剂为25mM NH4HCO3)，37℃处理过夜。
5．多肽提取：用5%三*乙酸抽提酶解液，再用2.5%三*乙酸-50%ACN 混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀(多肽)最后溶于0.5%三*乙酸中。
6．MS分析：参考相关MS仪器使用手册。


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·膦酰二肽溶液(10mg/mL)
编号：BTN130545
英文名称：Phosphoramidon Solution
规格：10mL
本品为10mg/mL的膦酰二肽水溶液，工作浓度为4-330μg/mL。膦酰二肽(N-(α-鼠李吡喃糖基膦酰胺)-L-亮*酸-L-色*酸)，分子量是579.6，可溶于水，是一种来自微生物的蛋白酶抑制剂。可以特异性抑制*嗜热蛋白酶、胶原酶和微生物来源的金属内切蛋白酶。


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期三个月。


·环状DNA全基因组扩增试剂盒
编号：BTN100947
英文名称：Circular DNA Whole Genome Amplification Kit
规格：30次
本产品基于WGA的、专门用于环状DNA(如质粒)扩增的全基因组扩增试剂盒，优化后的反应体系对环状DNA全基因扩增有良好的效果，可以方便、简单、快速、经济的得到环状DNA样品的扩增产物。

产品特点：
1. 线状DNA清除剂可以清除残留的线状DNA，保留环状DNA，包括超螺旋DNA、带裂口(nick)的环状DNA和带缺口(gap)的环状DNA。
2. WGA采用基于phi29 DNA聚合酶的MDA法，能得到平均长度在10Kb以上的扩增产物，还具有高产量和高保真性的特点。
3.可以将环状DNA扩增上万倍，是保留珍贵痕量DNA样品的唯一办法。
4.可使用各种环状DNA样品，包括质粒DNA，环状病毒DNA，线粒体DNA等。
5. 操作简便快捷，恒温(30℃)反应，无须PCR仪即可实现扩增。
6.产物可用于多种后续试验，包括酶切、克隆、文库构建、测序、基因芯片分析等。

试剂盒组成：

成分	规格
线状DNA清除剂溶液A	100μl
线状DNA清除剂溶液B	30μl
WGA DNA变性液	75μl
WGA溶液A	150μl
WGA溶液B	300μl
Phi29 DNA聚合酶(10U/μL)	15μl
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、去除环状样品中的线状DNA(线状DNA量不超过5μg)
1.在干净塑料离心管中，按下表加入各成分(30μL体系)：

成分	样品	正对照	负对照
自备DNA样品(1-10μg)	(样品)	(用环状DNA)	(用线状DNA)
线状DNA清除剂溶液A	3μL	3μL	3μL
线状DNA清除剂溶液B	1μL	1μL	1μL
	补水到30μl	补水到30μl	补水到30μl

2. 加200μL石蜡油后，37℃保温16小时。注意：保温时间过短可能会形成短的DNA片段，影响后续反应，所以最好保温16小时。必须加石蜡油，否则长时间保温期间水分会蒸发到管盖上。如果使用热盖打开的PCR仪则可以不加石蜡油。
3. 65℃加热灭活线状DNA清除反应的酶。
4.电泳检测酶切效果。本产品不清除带裂口(nick)和带缺口(gap)的环状DNA(如质粒)，所以这些片段将不会消失。如果所含线状DNA超过5μg，则需要用非酶线性DNA清除剂清除或者稀释后用本法处理。
5. WGA扩增需要100pg-100ng的环状DNA，一般环状DNA的浓度都高于此范围，则需用超纯水将DNA稀释到40pg-40ng/μL，稀释过程中线状DNA清除反应中的成分也相应稀释，故一般不会影响后续WGA反应。如果样品中DNA浓度过低，则需要用微量核酸沉淀剂(需另买)沉淀后再溶解到适当体积的超纯水中，沉淀过程中线状DNA清除反应中的成分也被去除。

二、碱变性(对环状DNA，碱变性法一般优于热变性法，推荐用户使用)
6.在PCR塑料管中加入不超过2.5μL环状DNA样品。如果体积不足2.5μL，则用超纯水补齐。最好同时做一个不加样品的阴性对照。
7. 加入等体积(2.5μL)WGA DNA变性液，轻柔吹打混匀。
8.室温放置2分钟变性。
9. 加入5μl WGA溶液A，轻柔吹打混匀后立即进入第15步。注意：热变性的DNA样品不能久存，否则DNA会缓慢复性，所以必须马上进入后续处理。

三、热变性法
10.在PCR塑料管中加入1-5μL纯化好的环状DNA，用量在100pg-100ng之间。最好同时做一个不加DNA模板的阴性对照。
11. 加入5μL WGA溶液A，轻柔吹打混匀。
12. 如果不足10μL，补水到10μL。
13.在PCR仪器上 95℃加热变性3～5分钟，其间最好打开PCR仪的热盖。也可以使用95℃水浴加热3分钟。
14. 热变性结束后短暂离心(将蒸发到管壁的水甩下)，然后将样品管在冰上放置至少5分钟，立即进入第15步。注意：热变性的DNA样品不能久存，否则DNA会缓慢复性，所以必须马上进入后续处理。

四、WGA反应
15.在10μL碱变性或热变性的DNA样品中，加入10μL的WGA溶液B，轻柔吹打混合均匀。
16. 加入0.5μL Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)，轻柔吹打混合均匀。
17. 30℃保温3-12小时。最好使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴，最好在样品管中加入50μL石蜡油以防水分蒸发，因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁，从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高，WGA三小时即可检测到DNA扩增。
18. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注：由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性，所以最好将其灭活以免干扰后续反应。
19. 立即取2-5μL WGA反应液进行电泳检测扩增效果。
20.扩增的DNA可以用于后续试验或放冰箱长期保存。


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·miRNA分离纯化试剂盒(沉淀法)
编号：BTN90203
英文名称：miRNA isolation Kit(precipitation method)
规格：50次
microRNA(miRNA)和RNA干扰研究是当今分子生物学研究的一大热点，但快速分离和纯化相关的小RNA十分棘手，是目前研究 miRNA的主要技术障碍之一。目前国外相关产品寥寥无几，并且基本采用先提总 RNA 再富集其中的小RNA的两步法策略，国内相关产品更是一片空白。百奥莱博为满足广大用户的需求，开发了具有自主知识产权的本产品。

试剂盒特点：
1.从总 RNA中直接分离纯化小RNA，不需要使用离心吸附柱。得到的小RNA 长度大部分在 200nt以下，包括 5S RNA、tRNA、 miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
2. 操作简单快速，整个过程只需要约30分钟。
3.小RNA 纯净，OD260/280一般都在 1.9以上。
4.可用于RT-PCR、miRNA 标记、microarray等后续实验。
5. 此方法能去除 90%左右的大 RNA，但会有少量残留大 RNA，如果需要纯度更高，可以选择 PAGE 回收法。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B	10ml
溶液C	50ml
RNase-free 水	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在纯化好的100μl 总 RNA(含大 RNA和小RNA)中，加入50μl溶液A，振荡 30秒混匀。如果 RNA样品体积不足 100μl，可以用RNase-free水补足，如果体积超过 100μl，可以用本公司核酸浓缩剂浓缩到 100μl。
2.室温 12000～15000g离心 30分钟。小RNA在上清中，大 RNA在沉淀中。
 注意：离心时间不能短于30分钟，否则大 RNA沉淀不充分。
3.小心将上清液转移到干净的1.5mL RNase-free塑料离心管中。留下的沉淀可以用 75%乙醇洗涤后做大 RNA电泳对照用。
4.在上清液中加入200μl溶液B，振荡 30秒混匀。
5.室温 12000～15000g离心 10分钟，小心弃上清。由于溶液B中有惰性的助沉剂，所以得到的小RNA沉淀肉眼可见。
6. 加入1mL溶液C，震荡数秒。
7.室温 12000～15000g离心 10分钟，小心弃上清。
8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体(约50μL左右)。
9.在沉淀中(含小RNA)加入30-100μl RNase-free 水，吹打溶解即得小RNA溶液。注意：不能只吹打管底部分，还需要吹打整个离心管管壁的离心面部分，因为上面也有有小RNA沉淀。
10. 最好先 PAGE-银染检测小RNA 纯度再使用。

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