即用型PMSF溶液(100mM) 蛋白质研究

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即用型PMSF溶液(100mM) 蛋白质研究由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多即用型PMSF溶液(100mM)等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：即用型PMSF溶液(100mM) 蛋白质研究
编号：RFT193
规格：10ml
品牌：百奥莱博
PMSF是一种不可逆的丝*酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶等，作用原理是特异性识别并磺化决定酶活性的丝*酸残基活性位点。此外，其对半胱*酸蛋白酶(如木瓜蛋白酶)和哺乳动物来源的乙酰胆碱酯酶也有抑制效果。PMSF常在细胞或组织裂解之前加入到裂解液中以预防蛋白的降解。PMSF可以单独使用，也常与其他蛋白酶抑制剂如胃抑肽酶A或者磷酸酶抑制剂如正钒酸*混合使用。

本产品配备有PMSF溶解液，可以方便配制成100mMPMSF储备液。由于PMSF不溶于水，有毒性，不稳定的缺点，另有PMSF的无毒替代物，AEBSF(货号：AE1020)，活性和功能与PMSF相同，具有毒性低，稳定，溶于水的优点。在蛋白提取中，PMSF推荐使用终浓度为0.1-1 mM，由于PMSF在水系缓冲液中极其不稳定，必须现用现加。

配制使用方法：
取一管PMSF晶体全部加入到PMSF溶解液中，彻底溶解后即配成100mMPMSF溶液。在蛋白提取缓冲液中稀释100倍使用，如500μl提取缓冲液中加入5μl。
注：PMSF溶液在水系缓冲液中极其不稳定，必须现用现加。

储存条件：-20℃，有效期6个月。

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·细菌基因组DNA提取试剂盒
编号：RFT037
英文名称：Bacterial genomic DNA Extraction Kit
规格：50次|100次
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取细菌(革兰氏阳性菌和阴性菌)的基因组DNA。溶菌酶能有效去除细菌细胞壁；蛋白酶K能把核酸解离出来； RNaseA能去除痕量的RNA污染；离心吸附柱能够高效、专一吸附DNA，最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次	100次	贮存方式
缓冲液GA	15 ml	30 ml	室温
缓冲液GB	15 ml	30 ml	室温
去蛋白液GD(浓缩液)	18 ml	36ml	室温
漂洗液GW(浓缩液)	25 ml	25 ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	15ml	室温
蛋白酶K(20mg/ml)	1 ml	2×1 ml	-20℃
溶菌酶(5mg/ml)	1ml	2×1 ml	-20℃
RNase A(10mg/ml)	1ml	1 ml	-20℃
吸附柱CG	50个	100个	室温
收集管(2 ml)	50个	100个	室温
说明书	1份	1份

准备工作：
1、准备55℃和70℃水浴；无水乙醇；1.5ml灭菌离心管。
2、按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液GW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3、每次使用前请检查缓冲液GA，缓冲液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、取细菌培养液1–2 ml，10,000 g离心1分钟，尽量吸净上清；向细菌沉淀中加入180μl EB，旋涡混匀后加入18μl 溶菌酶，室温放置10-15分钟，期间间歇混匀几次。
注：溶菌酶的用量和处理时间与处理的细菌种类密切相关，用户可以根据细菌种类进行调节。如革兰氏阳性菌应将处理时间延长到30-60分钟。
2、10000g离心1分钟，吸弃大部分上清，留下约10μl液体，彻底混匀。
注：由于余留的液体较少，彻底混匀菌体不太容易，用手指弹动管壁附加枪头反复吹打既能完全混匀菌体。混匀一定要彻底，否则容易导致步骤8中离心柱堵塞。
3、向菌体沉淀中加入200μl缓冲液GA，混匀。
4、向管中加入20μl 蛋白酶K，混匀，55℃处理15-30分钟，期间间歇混匀2-3次至溶液清亮。
注：加入蛋白酶K后会产生絮状物，消化彻底的标志是絮状物完全消失，溶液变清亮。如消化不彻底，会导致步骤8中离心柱堵塞。
5、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液，混匀后室温放置2分钟。
6、加入220μl缓冲液GB，混匀，70℃放置10-30分钟(对于革兰氏阳性菌，时间应延长到60分钟)。
注：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置相应时间后溶液会变清亮。如溶液未变清亮，应延长70℃处理时间。如果絮状物不能处理干净，容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
7、加入220μl无水乙醇，充分混匀。
注：加入乙醇后会产生絮状沉淀，可用枪头反复抽打1-2次将沉淀弄碎后再上柱。如果絮状物未做处理，容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
8、将上一步所得溶液和絮状沉淀加入到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，11000g离心5分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
注：如果出现吸附柱堵塞现象，可将离心时间延长到10分钟。
9、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11,000 g离心2分钟，倒掉废液，吸附柱放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入700μl漂洗液GW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11,000 g离心60秒，倒掉废液，吸附柱放入收集管中。
11、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液GW，11,000 g离心60秒，倒掉废液。
12、吸附柱CG放回收集管中，11,000 g离心2分钟。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
13、将吸附柱CG转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，11,000 g离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于50μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
14、DNA产物-20℃保存。

DNA浓度及纯度检测：
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。

储存条件：室温，有效期12个月。


即用型PMSF溶液(100mM) 蛋白质研究关键词：RFT193,100mM,即用型PMSF溶液(100mM),Phenylmethanesulfonyl fluoride


·磷酸酶抑制剂混合物(100×)
编号：RFT192
英文名称：Phosphatase inhibitor cocktail
规格：1ml|5×1ml
本品是一种用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物等蛋白提取及其它相关用途的磷酸酶抑制剂混合物(Imidazole，Sodium fluoride, Sodium tartrate dihydrate, Sodium molybdate，β-glycerophosphate and Sodium orthovanadate in H2O)，可广泛抑制蛋白提取物中的酸性、碱性、丝*酸/苏*酸和酪*酸磷酸酶。一个包装的本产品通常足够用于100ml的裂解液的配制。

细胞或组织等提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。本磷酸酶抑制剂混合物可以有效抑制常见磷酸酶对于蛋白的去磷酸化作用，保持蛋白原有的磷酸化状态。*化*是酸性磷酸酶可逆抑制剂；咪唑是碱性磷酸酶抑制剂；β-甘油磷酸是丝*酸/苏*酸磷酸酶可逆抑制剂；正钒酸*是碱性磷酸酶和酪*酸磷酸酶可逆抑制剂；酒石酸*是酸性磷酸酶抑制剂。

本产品为经优化和测试的用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物蛋白提取的磷酸酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝*酸/苏*酸、酪*酸、酸性及碱性磷酸酶抑制剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例把磷酸酶抑制剂混合物加入裂解液中即可用于样品蛋白的提取，并有效抑制蛋白的去磷酸化。

使用方法：

1、使用前常温溶解磷酸酶抑制剂混合物 (100×)，混匀，按照1:100 比例加入到组织细胞裂解物中，如1 ml裂解物中加入10μl抑制剂混合物。磷酸酶含量特别丰富的组织，可以适当提高加入量，使其终浓度为2～3×。含有磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。根据需要，可以同时考虑添加适当的蛋白酶抑制剂混合物。
2、待所需的抑制剂添加完毕并混匀后，就可以开始进行样品的裂解和蛋白提取。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

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