快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(高含量ROX校

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(高含量ROX校正染料) 核酸扩增(PCR)在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(高含量ROX校正染料) 核酸扩增(PCR)
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Fast TaqMan Mixture(High ROX)
编号：WE0153
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+等，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase，能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育30s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与快速热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，线性范围更宽。该产品适用范围广，可用于普通和快速定量PCR程序。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0151)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0152)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0153)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0151-5ml	WE0152-5ml	WE0153-5ml
2×Fast TaqMan Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Fast TaqMan Mixture(With ROX)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)所用探针的终浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序：
建议采用两步法PCR反应程序，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 s
变性	95℃	5 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	30 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、30s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1-4分钟，以使起始模板充分解链。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

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TEMED   10ml
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羟丙基-β-环糊精 Alginic acid 128446-35-5
2-*基-2-甲基-1,3-丙二醇 5"-ATP,Na2 115-69-5
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·Super DNA Ladder
编号：WE0243
规格：100次(500μl)|500次(5×500μl)
  Super DNA Ladder由10条DNA片段组成，分别为10000bp、5000bp、3000bp、2000bp、1,500 bp、1000bp、750 bp、500 bp、250 bp和100 bp。本产品含有1×Loading Buffer的DNA溶液，可取5μl直接电泳，使用十分方便；电泳时1000bp的DNA片段量约为150ng，显示亮带，其他条带的DNA量约为50ng。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、本产品可直接化冻混匀使用，无需加热。
2、请及时更换电泳缓冲液并使用新制琼脂糖凝胶，以免影响电泳结果。
3、DNA琼脂糖凝胶电泳时，凝胶的纯度对DNA条带的清晰度影响很大，因此尽量选用质量好的琼脂糖，推荐凝胶浓度为1%-3%，电压4-8 v/cm。
4、凝胶浓度与DNA片段的分离性能关系密切。凝胶浓度越大，对短片段DNA分离性能越好；反之，凝胶浓度越小，越有利于长片段DNA的分离。

使用方法：
取5μl 加入琼脂糖凝胶的加样孔中(如果加样孔较宽，大于6mm时，须适当增加上样量)，进行电泳。


1%琼脂糖凝胶电泳图(5μl)

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期24个月。


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