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774
- 英文名:
BalbMulti PCR Mix
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博供应的北京现货BalbMulti多重PCR Mix打折促销用于科研目的生化试验项目,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多BalbMulti多重PCR Mix等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:北京现货BalbMulti多重PCR Mix打折促销
英文名:BalbMulti PCR Mix
编号:WE0117
产地:国产|进口
规格:1ml|5ml
品牌:百奥莱博
BalbMulti PCR Mix浓度为2×,是由BaldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs及PCR稳定剂和增强剂等组成的预混体系。使用本产品无需进行繁杂的PCR反应条件的优化过程,只需进行简单的条件摸索即可轻松进行多重 PCR反应。本品中所含的BaldStar Taq DNA Polymerase是经化学修饰的热启动酶,可以有效减少PCR反应初期因引物错配而产生的非特异扩增。此酶与能提高反应特异性的PCR增强剂以及独特的缓冲体系相配合,使反应体系中所有的引物都能有效延伸,无需额外优化。此MasterMix中还包含GC Enhancer,有助于实现“困难”模板(比如高GC含量的模板)的高效扩增。BalbMulti PCR Mix适用于各种类型的多重PCR反应,比如微卫星分析、基因分型和SNP检测等。
产品组成:
| 组份 | 1ml | 5ml |
| 2×BalbMulti PCR Mix | 1ml | 5×1ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml |
质量控制:
1、经检验无外源核酸酶活性;
2、PCR方法检测无宿主残余DNA;
3、2~8℃存放三个月,活性无明显改变。
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×BalbMulti PCR Mix | 25μl | 1× |
| Primer Mix,10μM each | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | 适量 | |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:引物设计时,尽量减小各引物的Tm间的差值,差值尽量控制在5℃以内。各引物浓度请以终浓度0.05-0.2μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性扩增时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 10min | |
| 变性 | 95℃ | 30s | 30-40个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30s | |
| 延伸 | 72℃ | 1kb/min | |
| 终延伸 | 72℃ | 5min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品中所包含的BaldStar DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品在预变性95℃,10 min条件下实现酶的活化。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
北京现货BalbMulti多重PCR Mix打折促销正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·T4 DNA聚合酶
编号:WE0238
英文名称:T4 DNA Polymerase
规格:150U|750U
本产品是由大肠杆菌表达,表达基因的来源为T4嗜菌体。由于T4 DNA聚合酶同时具有5’→3’ DNA聚合酶活性和3’→5’ DNA外切酶活性,可以用于将5’端突出末端补平或3’端突出末端削平,也可用于通过置换反应进行标记DNA探针合成、通过引物伸长法解析mRNA转录的起始点、定点突变过程中第二链的合成以及不依赖于连接反应的PCR产物克隆等。本T4 DNA聚合酶的3’→5’ DNA外切酶活性比Klenow Fragment要高约100-1000倍,且对于单链DNA要比双链DNA活性更高。本酶不含5’→3’DNA的外切核酸酶活性,于70℃加热10分钟可使其失活,金属离子螯合剂可以抑制其活性。
·Taq酶抗体
编号:WE0121
英文名称:Taq Antibody
规格:500U|2500U
本品是抗Taq酶鼠单克隆抗体,适用于Hot Start PCR。Taq Antibody与Taq酶结合后能抑制DNA聚合酶活性,进而能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。Taq Antibody在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性,DNA聚合酶活性恢复,达到热启动效果。因此无需对Taq酶抗体进行特殊失活处理。
产品特点;
1、在37℃,可抑制>95%的聚合酶活性。
2、可提高PCR反应的特异性和灵敏性,包括复杂的人基因组DNA或cDNA模板,低拷贝的模板,多重PCR等。
3、PCR反应速度快于普通化学修饰的聚合酶。
活性定义:Taq Antibody与Taq DNA Polymerase混合,25℃孵育15 min后,将在37℃,30 min条件下抑制97%以上的1 U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定义为1U。
使用方法:
将Taq DNA Polymerase和Taq Antibody等体积混合,20-25℃下放置15 min冰上待用。
注意:通过实验,我们建议Taq Antibody和 Taq DNA Polymerase混合的分子数之比为13:1较为合适,实际操作中由于引物、目的产物或Taq DNA Polymerase不同,可以摸索一系列的比例以得到最合适的结果。
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增300 bp的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 |
| 10×PCR Buffer | 5μl |
| dNTP Mix,10μM each | 1μl |
| Forward Primer,10μM | 1μl |
| Reverse Primer,10μM | 1μl |
| Template DNA | 4μl |
| Taq酶和抗体的混合液 | 0.36μl |
| ddH2O | up to 50μl |
2、PCR反应条件,可以按照各种PCR用DNA Polymerase的常规PCR反应条件进行PCR反应。
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 2 min |
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
北京现货BalbMulti多重PCR Mix打折促销关键词:WE0117,BalbMulti PCR Mix,BalbMulti多重PCR Mix
·显影粉
编号:WE0303
英文名称:Developing Powder
规格:20套
·SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)
编号:WE0287
英文名称:SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)
规格:500ml
本产品为配制SDS-PAGE分离胶缓冲液,可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶,方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。
操作步骤:
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,最佳胶浓度请参考附表1。
I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可), 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层,使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
6、静置10~20分钟,等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
| SDS-PAGE 分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
| 6%胶 | 50-150 kD |
| 8%胶 | 30-90 kD |
| 10%胶 | 20-80 kD |
| 12%胶 | 12-60 kD |
| 15%胶 | 10-40 kD |
附表2. 配制SDS-PAGE分离胶
| 分离胶浓度 | 凝胶体积 | 所需各组分体积(单位:ml) | ||||
| 纯水 | 30%Acr-Bis(29:1) | 分离胶缓冲液(4×) | 10%APS | TEMED | ||
| 6% | 5ml | 2.75 | 1.0 | 1.25 | 0.05 | 0.004 |
| 10ml | 5.5 | 2.0 | 2.5 | 0.1 | 0.008 | |
| 15ml | 8.25 | 3.0 | 3.75 | 0.15 | 0.012 | |
| 20ml | 11 | 4.0 | 5 | 0.2 | 0.016 | |
| 8% | 5ml | 2.42 | 1.33 | 1.25 | 0.05 | 0.003 |
| 10ml | 4.8 | 2.7 | 2.5 | 0.1 | 0.006 | |
| 15ml | 7.25 | 4.0 | 3.75 | 0.15 | 0.009 | |
| 20ml | 9.7 | 5.3 | 5 | 0.2 | 0.012 | |
| 10% | 5ml | 2.08 | 1.67 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
| 10ml | 4.17 | 3.33 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
| 15ml | 6.25 | 5.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
| 20ml | 8.3 | 6.7 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
| 12% | 5ml | 1.75 | 2.0 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
| 10ml | 3.5 | 4.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
| 15ml | 5.25 | 6.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
| 20ml | 7.0 | 8.0 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
| 15% | 5ml | 1.25 | 2.5 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
| 10ml | 2.5 | 5.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
| 15ml | 3.75 | 7.5 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
| 20ml | 5 | 10.0 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶
| 凝胶体积 | 所需各组分体积(单位:ml) | ||||
| 纯水 | 30%Acr-Bis(29:1) | 浓缩胶缓冲液(4×) | 10%APS | TEMED | |
| 2ml | 1.14 | 0.34 | 0.5 | 0.02 | 0.002 |
| 4ml | 2.28 | 0.68 | 1 | 0.04 | 0.004 |
| 6ml | 3.42 | 1.02 | 1.5 | 0.06 | 0.006 |
| 8ml | 4.56 | 1.36 | 2 | 0.08 | 0.008 |
储存条件:2~8℃
北京现货BalbMulti多重PCR Mix打折促销关键词:WE0117,BalbMulti PCR Mix,BalbMulti多重PCR Mix
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