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文献和实验数后,软件才能自动生成标准曲线。建议标准品的浓度在5点以上。建议每个样品(包括标准品)都按照统计学要求作一定数量的复管。6、参比荧光如果使用的是ABI公司的定量PCR试剂,如TaqMan Universal PCR Master Mix或者SYBR Green PCR Master Mix等,参比荧光(Passive Reference)选ROX;如果使用的试剂中不含有参比荧光,请选None。完成后点击右上角的X按钮,关闭Well Inspector窗口。7、循环参数切换到Instrument页面,设定
Native Chromatin Preparation and Illumina/Solexa Library Construction
(1X PBS containing 0.5 % bovine serum albumin, filtered) T4 DNA ligase (400 U/µL) and 10X buffer Taq polymerase (New England Biolabs) TaqMan PCR master mix (Applied Biosystems) (see Step 38) TE (1X, pH 7.4) Triton X-100
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度,需要摸索,从200nM到700nm等,设置不同浓度。3、每个引物浓度,从well 1到12设置4个样本,阳性cDNA 1和2,NTC以及H2O,做triplicate。4、若用ABI7000或7700,所有的PCR条件可设置成一致的,减少麻烦,当然,引物
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