北京miRNA cDNA第一链合成试剂盒优惠促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京miRNA cDNA第一链合成试剂盒优惠促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京miRNA cDNA第一链合成试剂盒优惠促销
英文名：miRNA cDNA Synthesis Kit
规格：25次
产地：国产|进口
编号：WE0157
  本试剂盒采用在miRNA 3’末端加多聚A尾的方法来使miRNA具有Poly(A)尾，之后再使用Oligo(dT)-Universal tag通用逆转录引物进行逆转录反应，最终合成miRNA对应的第一链cDNA。

  miRNA cDNA第一链合成试剂盒包含miRNA 3’末端Poly(A)尾修饰过程及修饰后逆转录过程需要的全部试剂。该试剂盒具有非常高的Poly(A)修饰和逆转录效率，可以从1ng-2μg的total RNA中有效获得miRNA对应的cDNA第一链。并且操作简便、快捷，可以用于从一个反应合成的cDNA中同时检测多种miRNA，不仅减少了误差、节约了样品，同时还实现了检测的高通量。

试剂盒组成：

 

组份	25次
Tris-Hcl，1 mM，PH 8.0	1ml
E.coli Poly(A)Polymerase，5U/μl	15μl
10×Poly(A)Polymerase Buffer	80μl
ATP，10 mM	15μl
RT Primer，25μM	90μl
5×UltraRT Buffer	120μl
UltraPure dNTP Mix，10 mM each	30μl
UltraRT	15μl
RNase-Free Water	1ml

备注：本试剂盒须与miRNA荧光定量检测试剂盒(WE0158)配套使用。

自备实验材料：1ng-2μg的总 RNA，或0.1ng-1μg的小分子RNA。

注意事项：
预防RNase污染，应注意以下几方面：
1、使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2、玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3、配制溶液应使用无RNase的水。
4、操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

使用方法：

A．miRNA加Poly(A)尾的过程：
1、首先根据所用RNA的量，按如下公式，用1 mM Tris(PH8.0)来稀释10 mM ATP：
ATP稀释系数=5000/__ng的总RNA
例：如果总RNA的起始用量为100ng，那么ATP稀释系数=5000/100=50。即将ATP稀释50倍(1μl的10 mM ATP加49μl的1 mM Tris，PH8.0)。
2、向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入以下试剂至总体积25μl。
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
total RNA	Xμl	可达2μg
10×Poly(A)Polymerase Buffer	2.5μl	1×
第“1”步中稀释好的ATP	1μl	—
E.coli Poly(A)Polymerase, 5U/μl	0.5μl	2.5 U
RNase-Free Water	up to 25μl	—

注意：反应中使用的total RNA必须含有小分子RNA。

此过程也可以直接使用小分子RNA(建议加入量为2-5μl。请根据目的miRNA的丰度来确定加入量)。

3、轻轻混匀上述反应液，短暂离心将液体收集于管底。37℃，孵育15分钟。此过程结束后，立刻进行第一链cDNA的合成，或于-20℃暂存。如需长期保存，建议存放于-80℃。

B．修饰后的miRNA cDNA第一链合成的过程：
1、向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入下表中试剂，至终体积20μl：
 

试剂	20μl反应体系
上述Poly(A)反应液	4μl
UltraPure dNTP Mix，10 mM each	1μl
RT Primer，25 μ M	3μl
5×UltraRT Buffer	4μl
UltraRT	0.5μl
RNase-Free Water	7.5μl

2、轻轻混匀上述反应液，短暂离心将液体收集于管底。42℃，孵育50分钟。
3、85℃，孵育5分钟，终止反应。合成的cDNA反应液可以直接进行荧光定量检测实验，也可以于-20℃保存备用。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

北京miRNA cDNA第一链合成试剂盒优惠促销极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·植物RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号：WE0200
英文名称：RNAtiqu Plant RNA Extraction Kit(DNase I)
规格：50次
  本试剂盒用于从各种植物中提取纯化高品质总RNA，也适用于真菌菌丝RNA的提取。独特的Shredder分离柱，用于匀质化和过滤高粘度的植物或真菌裂解物，同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化，使多聚糖等各种污染物通过洗涤被有效去除，经洗脱的RNA可直接用于各种下游实验。由本试剂盒提取RNA分子量大于200碱基，纯度高，几乎无DNA残留。如果是对微量DNA非常敏感的RNA实验，残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除。提取的RNA可用于Northern Blot、Dot Blot 、RT-PCR和体外翻译等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RL	35ml
Buffer RLC	35ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
过滤柱FL及收集管	50套
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
② 配制溶液应使用无RNase的水。
③ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
② 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
③ 配制溶液应使用无RNase的水。
④ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
3、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取的量和质量。
4、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。Buffer RLC使用时不需加β-巯基乙醇。
5、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
6、Buffer RL和Buffer RLC如果产生沉淀，请加热使其溶解后室温放置。
7、所有离心步骤均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、50-100 mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末，加入600μl Buffer RL(使用前检查是否加入β-巯基乙醇)或Buffer RLC。涡旋振荡使其充分裂解。
注意：
① Buffer RL主要成分为异硫*酸胍，适用于大多数植物组织的裂解。但有些植物组织(如玉米的胚乳)，由于次级代谢产物较特殊，异硫*酸胍使样品产生沉淀，导致RNA提取效果不佳，此时可加入Buffer RLC替代Buffer RL。
② 56℃孵育1-3分钟有助于组织的裂解，但是淀粉含量高的植物不要进行高温孵育。
2、将步骤1所得全部液体转移至已装入收集管的过滤柱中，12000rpm(~～13400×g)离心2分钟，将收集管中的上清液转移到一个新的离心管(自备)中。
注意：
① 在吸取液体时可以将枪头尖端剪掉，便于取样。
② 过滤柱FL可以除去大部分的碎片，但仍会有小部分流出，离心后会在收集管内形成沉淀，在进行下一步时注意避免吸到沉淀。
3、在步骤2所得干净的裂解液中加入0.5倍体积的无水乙醇，迅速混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，但不影响后续试验。
4、将上步得到的溶液转移到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入; 12000rpm离心15秒，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1, 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心15秒,弃废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心1分钟，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中的无水乙醇。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱装入新的离心管中，向吸附膜的中间加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
① RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
③ 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。


北京miRNA cDNA第一链合成试剂盒优惠促销关键词：miRNA cDNA第一链合成试剂盒,miRNA cDNA Synthesis Kit,WE0157


·罗丹明山羊抗大鼠IgG(H+L)
编号：WE0374
英文名称：Goat Anti-Rat IgG, TRITC Conjugated
规格：100μl
本产品为TRITC标记的经抗原亲和纯化的山羊抗体，特异识别大鼠IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低，稳定性好。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学的研究。TRITC(四甲基异硫*酸罗丹明)为罗丹明的衍生物，与FITC的黄绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。

免疫原：大鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：TRITC，Amax=550; Emax=570
应用范围：对于大多数实验(1：25-100)

·一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料)
编号：WE0150
英文名称：BaldStar TaqMan One Step RT-qPCR Kit(High ROX)
规格：100次
  本试剂盒是采用探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效，提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:(WE0148)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0149)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0150)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

组份	WE0148-100次	WE0149-100次	WE0150-100次
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix	100μl	100μl	100μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、本试剂盒中的各试剂应尽量避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-qPCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
5、本试剂盒推荐使用特异性探针，建议采用专业的设计软件进行设计。


使用方法：
以下举例为常规的反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应的改进和优化。(反应液的配置请在冰上进行)

1、将RNA模板、引物、2×BaldStar TaqMan One Step Buffer、BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系：
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Probe，10μM	0.5μl	0.2μM
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix	1.0μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(可选)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常RNA模板的量以10 pg – 100ng为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
逆转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s

注意：
1)1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、5-10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


北京miRNA cDNA第一链合成试剂盒优惠促销关键词：miRNA cDNA第一链合成试剂盒,miRNA cDNA Synthesis Kit,WE0157

BL1042 胰蛋白胨大豆琼脂TSA
靛蓝胭脂红 Pyruvic acid 860-22-0
碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液(10×)   500ml
2-(环己*(代"胺"))乙磺酸 2-Sulfobenzoic acid 103-47-9
SJ0132 羧甲基纤维素 CM-52  
BL1134 TOP10受体菌
ARB12359 大鼠表皮生长因子(EGF)elisa检测操作说明书 Rat epidermal growth factor,egf ELISA KIT
二氧化硅 Lithium Carbonate 60676-86-0
9001-40-5 6-磷酸葡萄糖脱*酶 Glucose-6-phosphate Dehydrogenase 
F040103 牛血清白蛋白偶联三聚*胺 BSA-MEL
咔唑 RBITC 86-74-*(代"8")
超纯dNTP Mixture(10mM each) 
57-50-1 Sucrose  蔗糖
ARB13276 小鼠雌二醇受体(ER)含量测试 Mouse estradiol receptor,er ELISA KIT
甲*(代"酚")红指示剂   100ml

北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购北京miRNA cDNA第一链合成试剂盒优惠促销。