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-20℃
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长期
- 英文名:
First strand synthesis kit of cDNA corresponding to miRNA
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293
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒厂家现货,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒厂家现货
编号:ALH189
产地:国产|进口
英文名:First strand synthesis kit of cDNA corresponding to miRNA
规格:25次
本试剂盒采用在miRNA 3’末端加多聚A 尾Poly(A),再使用Anchored oligo(dT)通用逆转录引物进行逆转录反应,最终生成miRNA 对应的cDNA 第一链。miRNA cDNA 第一链合成试剂盒包含miRNA 3’末端Poly(A)修饰过程和逆转录过程的所有试剂,该试剂盒具有高效的Poly(A)修饰和逆转录效率, 可从20pg-2μg 的total RNA 中有效制备miRNA对应的cDNA 第一链。一次合成的cDNA可检测多个microRNA,节约了样品和成本。(该试剂盒可与miRNA荧光定量PCR检测试剂盒(ALH190)配套使用。)
试剂盒组分(25次):
E.coli Poly(A) Polymerase(5U/μl)————————50U
10 × Poly(A) Polymerase Buffer—————————100μl
10 × rATP solution———————————————50μl
25μmol RT primer————————————————50μl
RTase (200U/μl)-————————————————5000U
5×RT Reaction Mix-———————————————200μl
RNase free H2O-—————————————————1ml
注意事项:
用本试剂盒合成得到的cDNA模板用于下游PCR或者荧光定量PCR检测时,可以根据实际情况选择使用量,如果发现有非特异扩增条带,或者融链曲线显示有非特异扩增,往往提示cDNA模板过量, 可以将上述cDNA模板稀释几十到几百倍甚至上千倍再使用。
储存条件:-20℃。
本品别名:miRNA对应cDNA第一链合成试剂盒|microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒
想要了解更多关于microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒厂家现货的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·粪便基因组DNA提取试剂盒
编号:ALH170
英文名称:Fecal genomic DNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒适用于快速提取各种粪便DNA。常规的DNA纯化方式并不能有效地去除粪便中存在的大量抑制因子而导致下游实验的失败,如PCR不能扩增出所需片段。该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,能有效去除动物粪便中各种影响下游实验(如PCR)的抑制因子,并能高效地回收粪便中的基因组DNA。动物粪便样品经特殊缓冲液ASL重悬后,70℃处理5分钟裂解细菌;离心去除不溶解的杂质,蛋白酶K消化进一步去除蛋白和杂质;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除, 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份(50次):
缓冲液ASL—————————0.5ml
杂质清除剂AB———————50ml
结合液CB—————————20ml
抑制物去除液IR——————25ml
漂洗液WB —————————25ml
洗脱缓冲液EB ———————20ml
蛋白酶K——————————20mg
吸附柱AC —————————50个
收集管(2ml)————————50个
产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的*酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速,简捷,单个样品操作一般可在40分钟内完成。
4.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。
3. 结合液CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保pH大于7.5, pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在-20℃。DNA 如果需要长期保存,可以用TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
5. PCR 可能被过量的DNA(一般大于1μg)抑制,使用最小用量的洗脱DNA(适当稀释)反而可以得到更好的扩增。一般加入的洗脱DNA 体积不要超过总PCR反应体积的10%。我们建议在PCR反应体系中加入终浓度0.1 μg/μl的BSA(牛血清白蛋白)有助于得到最佳扩增效果。
储存条件:室温,有效期12个月。
microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒厂家现货关键词:microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒,miRNA对应cDNA第一链合成试剂盒
BTN61205 血清白蛋白清除剂 Serum Albumin Erasol
马铃薯淀粉 Sodium bromide 9005-25-8
ARB12931 小鼠孕激素/孕酮(PROG)酶免分析 Mouse progesterone,prog ELISA KIT
CYB161043 牛IgG(冻干粉)
乙二*(代"胺")四乙酸二*锰盐 Boc-Glu(OtBu)-OH 15375-84-5
F030422 胶体金标记兔抗人IgG FC抗体 Rabbit Anti-Human IgG(FC)*GOLD
ARB10295 人天门冬*酸转*酶/谷草转*酶(GOT/GPT)尿液中含量检测 Human aspartate aminotransferase,got/gpt ELISA KIT
PY02-185 葡萄糖半固体发酵管 250克
邻甲*(代"酚")酞络合剂 CSA 2411-89-4
ARB10770 人抗Sc1-70抗体(Sc1-70-Ab)含量测试 Human sc1-70 antibody,sc1-70-ab ELISA KIT
ARB11733 人富亮*酸α2糖蛋白1(LRG1)elisa检测操作说明书 Human leucine-rich alpha-2 glycoprotein 1,lrg1 ELISA KIT
聚氧乙*(代"烯")月桂醚 Sodium 1-heptanesulfonate 9002-92-0
胆固醇氧化酶 STAB 9028-76-6
CBZ-D-*丙*酸 Cyclooctanone 2448-45-5
ARB11999 大鼠P选择素(Ps)Elisa定量检测 Rat P-Selectin,ps ELISA KIT
BTN90707 动植物总蛋白微量提取试剂盒 Animal-Plant Total Protein Miniprep Kit
microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒厂家现货关键词:microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒,miRNA对应cDNA第一链合成试剂盒
·组织细胞DNA/RNA分离提取试剂盒
编号:ALH023
英文名称:Tissue cell DNA/RNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒设计用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶,然后裂解混合物DNA/RNA同时通过一个基因组DNA吸附柱,基因组DNA被吸附而RNA穿透滤过。DNA吸附柱上基因组DNA经过一系列漂洗-离心后洗脱得到纯净基因组DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于RNA吸附柱上, 再通过一系列快速的漂洗-离心洗脱得到纯净的RNA。无*酚、*仿DNA/RNA快速提取技术基础上配合独特的分离技术同时得到的RNA/基因组DNA纯度高,互不干扰。得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。
试剂盒特点:
1.完全不使用有毒的*酚,*仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速,简捷,单个样品RNA/基因组DNA分离提取操作一般可在40分钟内完成。
3.试剂盒的独特吸附柱和配方确保有效清除基因组DNA残留,一般情况下得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4. 多次柱漂洗确保RNA/基因组DNA高纯度,可直接用于下游各种实验。
试剂盒组份(50次):
裂解液RLT Plus———————————50ml
去蛋白液RW1—————————————40ml
漂洗液RW——————————————10ml
RNase-free H2O———————————10ml
70%乙醇———————————————9ml RNase-free H2O(第一次使用前按说明加指定量乙醇)
抑制物去除液IR———————————25ml
漂洗液WB——————————————15ml
洗脱缓冲液EB————————————10ml
基因组DNA吸附柱和收集管———————50套
RNA吸附柱和收集管——————————50套
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力,否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大,例如胸腺脾脏DNA含量丰富,超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富,超过3×10^6细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量,如细胞不超过3~4×10^6,组织不超过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus、抑制物去除液IR、去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase污染,应注意以下几方面:
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA在裂解液RLT Plus中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。)
5. 关于DNA的微量残留:
一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留(DNase 消化也无法做到100%无残留),本公司的组织/细胞RNA/DNA分提试剂盒,由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA分离清除技术,绝大多数DNA已经被清除,不需要DNase 消化,可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free 的DNase I 处理以提高效果。本试剂盒还可以用于DNase I 处理后的RNA清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1 漂洗前,直接在吸附柱 上进行DNase I 处理。请联系我们索取具体操作说明书。
6. RNA纯度及浓度检测:
完整性: RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE 电泳缓冲液;150v,15分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA,电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA条带。动物rRNA大小分别约为5 kb 和2kb,分别相当于28S和18SrRNA。动物RNA样品中最大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍,否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯。
浓度:取一定量的RNA提取物,用RNase-free水稀释n倍,用RNase-free水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280 测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40。
储存条件:室温,有效期12个月。
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如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
性,与目的模板竞争引物和酶等,可能导致PCR扩增效率的下降,影响定量结果的准确性;另外,并不是每个基因都能在相邻的且大小合适的外显子上找到合适的跨内含子引物,所以,很大部分实验需要在一个外显子上设计引物,这时就必须经过去除基因组DNA步骤,才能得到准确可靠的结果。 传统基因组DNA去除的方法采用对RNA进行处理,由于引入了蛋白(DNase I),后续需要进行氯仿抽提纯化,操作繁琐,耗时长,RNA的回收率低。TIANGEN公司的FastQuantcDNA第一链合成试剂盒(KR106
miRNA 是一种既可爱又可恨的小东西,它们深居简出,它们飘忽不定,它们似乎总是在和我们捉迷藏,当我们费尽力气以为即将要将它们掌控的时候,它却又顽皮的从我们的指缝中溜走,而我们却又毫无办法。同学莫怕,TIANGEN 即将上市的最新产品 miRcute 增强型 miRNA cDNA 第一链合成试剂盒(KR211)与 miRcute 增强型miRNA荧光定量检测试剂盒(SYBR Green)(FP411)这对黄金搭档轻松解决所有问题,反转加A一步完成,高灵敏度检测试剂让低丰度miRNA清晰
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