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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
816
- 英文名:
2×Pfu MasterMix(With Dye)
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京2×Pfu MasterMix(含染料)促销由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化科学研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多2×Pfu MasterMix(含染料)等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:北京2×Pfu MasterMix(含染料)促销
产地:国产|进口
编号:WE0108
品牌:百奥莱博
英文名:2×Pfu MasterMix(With Dye)
规格:5ml
本品为Pfu DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。Pfu DNA Polymerase具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性,因此在DNA扩增过程中具备纠错能力,是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷,可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,重复性好。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测,无需再使用上样缓冲液。本产品所含的Pfu DNA聚合酶具有错配率低,耐高温的特点,适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等反应。
产品组成:
| 组份 | 1ml | 5ml |
| 2×Pfu MasterMix(With Dye) | 1ml | 5×1ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意:2×Pfu MasterMix含有Pfu DNA Polymerase, 3 mM MgCl2和400μM each dNTP。
质量控制:
1、经检验无外源核酸酶活性;
2、PCR方法检测无宿主残余DNA;
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因;
4、2~8℃存放三个月,活性无明显改变。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×Pfu MasterMix(With Dye) | 25μl | 1× |
| Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:用Pfu酶扩增时,引物的纯度要求较高,引物长度大于18个碱基,引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 60 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好,对于GC含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性,所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低,延伸时间根据所扩增片段大小设定,本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性,PCR产物为平端不能直接用于T/A克隆,如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
北京2×Pfu MasterMix(含染料)促销极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·抗VSV-G标签单克隆抗体
编号:WE0340
英文名称:Anti VSV-G-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格:20μl
疱疹性口炎病毒(VSV)属于弹状病毒家族,在出芽过程中从宿主细胞的细胞膜中释放出来,糖蛋白(VSV-G)包含一个区域,该区域的细胞膜外近端是作为VSV病毒出芽所必需的结构。VSV-G标签抗体能识别C末端,内部以及N末端的VSV-G标签(YTDIEMNRLGK)融合蛋白。
抗体类型:鼠单克隆抗体IgG1
免疫原:人工合成多肽(YTDIEMNRLGK)
应用范围:WB(1:500-5000)、ELISA(需摸索最佳稀释度)
·Western Ladder笔
编号:WE0294
英文名称:Western Blot Ladder Pen
规格:1000次
蛋白免疫印迹(WB)是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,经常用于检测抗体和抗原之间的特异性,而且能够对目的蛋白进行定性或定量分析研究。但是在试验中,抗原或者抗体往往都不是单一的成分,这些可能会导致在最终底片曝光出多条条带,或出现一些不明分子量的条带,或者目的条带的位置都不能确定。因此确定这些条带的分子量对我们进行下一步的分析就显得非常重要。
目前,市场上有一些预染Marker,能很好监测我们的转膜效率,电泳转膜后能在杂交膜上看到Marker相应的条带,但是这些Marker 最终不能在底片上曝出条带。
Western Blot Ladder Pen 正是要为您解决这个问题,通过转膜后对着预染Marker或经过丽春红染色确定的非预染Marker的各条带进行相应的标记,最终这些笔迹都能在目的位置曝光出相应的条带,用作分子量标准。同时也可以用它在膜上做其它标记,或者用作阳性对照。
注意事项:
1、本产品适用于HRP底物系统。
2、WB Ladder Pen使用完成后,请水平放置于2~8℃,请勿冻存于-20℃。
3、使用前请先将WB Ladder Pen在纸上画几笔之后再在膜上做相应的标记。
4、标记过程中请勿用力太大,以免破坏膜的结构,轻划即可。
5、随着笔使用时间的增加,信号可能会逐渐减弱。
操作步骤:
1、电泳的过程中,可以使用预染蛋白Marker或者非预染蛋白Marker。
2、常规的转膜后,将膜取下。
a. 使用预染蛋白Marker的NC膜:去离子水漂洗膜后,使用上下两层滤纸或者卫生 纸吸掉膜上多余的液体(请勿将膜吸的过干)。
b. 使用非预染蛋白Marker的NC膜:丽春红染膜后,用铅笔将非预染蛋白Marker的 各个条带标记。TBST漂洗膜,以完全去掉膜上的丽春红,使用上下两层滤纸或者 卫生纸吸掉膜上多余的液体(请勿将膜吸的过干)。
3、使用WB Ladder Pen在膜上做好相应的标记(轻划即可),放置15秒之后将膜放置 于封闭液中封闭。
4、按常规步骤进行后续的WB试验。
储存条件:2~8℃
北京2×Pfu MasterMix(含染料)促销关键词:2×Pfu MasterMix(含染料),WE0108,2×Pfu MasterMix(With Dye)
·2×Bes Taq MasterMix(含染料)
编号:WE0104
英文名称:2×Bes Taq MasterMix(With Dye)
规格:1ml|5ml|25ml
本品是由Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。Es Taq DNA Polymerase具有扩增效率高、错配率低的优良性能。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,超过98%的PCR扩增能一次成功,同时复杂模板也能得到有效扩增,并可最大限度地减少人为误差和污染。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测,无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于常规PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。
产品组成:
| 组份 | 1ml | 5ml | 25ml |
| 2×Bes Taq MasterMix(With Dye) | 1ml | 5×1ml | 5×5ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml | 5×5ml |
注意:2×Bes Taq MasterMix含有Bes Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。
质量控制:
1、经检验无外源核酸酶活性;
2、PCR方法检测无宿主残余DNA;
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×Bes Taq MasterMix(With Dye) | 25μl | 1× |
| Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 2 min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Bes Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
北京2×Pfu MasterMix(含染料)促销关键词:2×Pfu MasterMix(含染料),WE0108,2×Pfu MasterMix(With Dye)
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