2×Taq Plus PCR MasterMix (不含染料

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名称：2×Taq Plus PCR MasterMix (不含染料)销*(代"售")
产地：国产|进口
编号：QN0970
品牌：百奥莱博
规格：1ml|5ml
PCR MasterMix包含三种酶(Taq，Pfu，Taq plus)，每种酶对应着两种PCR MasterMix(含染料和不含染料)，一共六种PCR MasterMix。

Taq：扩增效率最高的耐热DNA聚合酶，其扩增速度约为1-2kb/min。扩增碱基出错率为10-5左右。其产物未端带有A，可直接用于TA克隆。

Pfu：目前保真度最高的耐热DNA聚合酶，碱基出错率为10-6，但扩增效率低于Taq酶，一般能很好的扩增2kb以下的片段。其扩增速度约为500bp/min左右。其产物为平未端，须加A后才可用于TA克隆。

Taq Plus：Taq和Pfu的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高，保真度比Taq好。其扩增速度约为1000bp/min左右。其产物未端带有A，可直接用于TA克隆。

染料PCR MasterMix反应完后可以直接电泳检测。不含染料的PCR MasterMix反应完后加入上样缓冲液后电泳检测。

别名：2×Taq Plus PCR MasterMix (不含染料)
英文名称：2×Taq Plus PCR MasterMix (不含染料)
储存条件：-20
性状：液体

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·琥珀酸
编号：QN0622
英文名称：Succinic acid
规格：25g
别名：丁二酸
CAS号：110-15-6
分子式：C4H6O4
分子量：118.09
纯度：≥99%
性状：无色或白色单斜柱状结晶
溶解性：易溶于热水、乙醇和甲醇
熔点：188℃
沸点：235℃(部分转变为酸酐)
储存条件：室温干燥保存

·Pfu DNA 聚合酶
编号：QN0965
英文名称：Pfu DNA Polymerase
规格：500U|1000U|10KU
本公司生产的Pfu DNA Ploymerase是从克隆有Pyrococcusfuriosis DNA Ploymerase基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白，其分子量为90kDa。由于Pfu酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能纠正DNA扩增过程中产生的错配，而传统的Taq酶却不能，其它耐热DNA Polymerase如Vent、Deep Vent、Tli、UITma等虽具有校正功能，但Pfu酶是目前已发现的所有耐热DNA Polymerase中出错率最低的。Pfu酶无5’→3’核酸外切酶活性，PCR反应中的延伸速度一般为0.5-1kb/分钟，比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶热稳定性更好，95℃ 1小时仍保持90%以上的活性，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃而不影响其活性。Pfu酶的PCR产物为平末端，可加A处理再与T-载体连接或使用平末端克隆载体。一般用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析(SNP)和末端补平等。

Pfu来源：表达Pfu DNA聚合酶的大肠杆菌。
Pfu酶储存缓冲液：50mMTris-HCl，pH 8.2;0.1mM EDTA;1mM DTT;0.1% Nonidet P40;0.1% Tween 20;50% 甘油。
Pfu单位定义：在74℃条件下，30分钟内催化10 nmmoldNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需要的酶量为一个单位。
Pfu用途：1)常规PCR反应中的DNA高保真体外扩增;
2)基因定点突变和拼接。
Pfu注意事项：
1、 酶浓度：建议在50ml的体系中使用1.25个单位的Pfu DNA聚合酶，因为酶存在3’-5’外切酶活性，高浓度的酶可能会增加降解引物的可能性。最好在加完dNTP后再添加Pfu DNA聚合酶。并在有冰浴的条件下混合PCR反应中的各种成分。
2、延伸时间：Pfu DNA聚合酶的延伸速率低于Taq DNA聚合酶，大约为一分钟600个碱基(Taq DNA聚合酶大约为一分钟2000个碱基)，因此建议扩增1Kb的DNA用两分钟的延伸时间。对于大多数的反应而言，25～35个扩增循环就足够了。
Pfu保存：-20℃保存至少一年。

别名：Pfu DNA 聚合酶
英文名称：Pfu DNA Polymerase
储存条件：-20
性状：液体


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·维生素B12(钴胺素)
编号：QN0111
英文名称：Vitamin B12;Cyanocobalamin
规格：1g

别名：维生素乙B12;*钴胺;维他命B12
CAS号：68-19-9
分子式：C63H88CoN14O14P
分子量：1355.37
储存条件：RT
性状：深红色结晶或结晶性粉末

·ONPG
编号：QN0159
英文名称：o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside
规格：1g
本品ONPG通常作为测定β-半乳糖苷酶的底物。经β-半乳糖苷酶催化后可产生黄色产物，在410－420nm波长可以检测吸光度。

CAS号：369-07-3
分子式：C12H15O8N
分子量：301.25
储存条件：−20℃
性状：白色粉末

·pEGFP-N2 荧光表达载体
编号：QN1061
英文名称：o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside
规格：20μl
pEGFP-N2 encodes a red-shifted variant of wild-type GFP (1–3) which has been optimized for brighter fluorescence and higher expression in mammalian cells. (Excitation maximum = 488 nm;emission maximum = 507 nm.) pEGFP-N2 encodes the GFPmut1 variant which contains the double-amino-acid substitution of Phe-64 to Leu and Ser-65 to Thr

载体信息：
启动子：CMV
复制子：pUCori,f1ori
终止子：SV40poly(A)
载体别名：pEGFPN2, pEGFP N2
载体分类：哺乳细胞表达载体，荧光蛋白报告载体
载体大小：4737bp
载体标签：C-EGFP
原核抗性：卡那霉素(Kanamycin)
筛选标记：新霉素(Neomycin)
克隆菌株：DH5α
表达宿主：哺乳细胞
培养条件：37℃，LB培养基
5" 测序引物：CMV-F：5"-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3"
3" 测序引物：EGFP-N：5"-CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG-3"

储存条件：-20℃


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·ECL化学发光法检测试剂盒(兔IgG)
编号：QN1157
英文名称：ECL Western Blotting Detection Kit(Rabbit IgG)
规格：1盒
本试剂盒主要用于western blotting的化学发光显色，含有HRP标记抗兔IgG二抗。

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带(抗原所在位置)。

试剂盒组分：
封闭试剂———————————30g(可配制400ml)
10倍浓缩抗体稀释液——————50ml
HRP标记兔IgG二抗———————0.3ml，效价1:500～1000
ECL显色液-——————————25mlA+25mlB

常规电泳转膜后:
1)清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2)按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3)将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml,10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4)用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
6)用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入15ul的HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次10min。
8)根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1～5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间(从5秒到30分钟)以期达到理想结果。
注意事项：
1.请根据一抗来源选择试剂盒。
2.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果
条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3.TBS-T(0.01M，PH7.6)配制方法：称取NaCl 8.5g，Tris 1.21g，用800ml的双蒸水溶解，用盐*(代"酸")调PH到7.6，再加入0.5ml Tween-20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购2×Taq Plus PCR MasterMix (不含染料)销*(代"售")。