北京现货猪蓝耳通用单重凝胶PCR检测试剂盒(PRRSV)品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括北京现货猪蓝耳通用单重凝胶PCR检测试剂盒(PRRSV)品牌在内的动物疫病PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：北京现货猪蓝耳通用单重凝胶PCR检测试剂盒(PRRSV)品牌
编号：SYA552
等级：科研试剂
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：10次/盒|48次/盒

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·口蹄疫病毒(FMDV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA401
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
口蹄疫病毒实时荧光qRT-PCR检测操作说明书是按照参照OIE《Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2009》国际标准和《中国国家标准口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法》(GB22915-2008)而制备的商业化检测试剂盒。试剂盒的探针报告基团为6-FAM，能对样品中口蹄疫病毒进行快速检测，具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点。

二、用途：
本试剂盒适用于检测发病动物血清、水泡液、淋巴结等标本以及细胞培养液中所有血清型(包括A、O、C、南非1、南非2、南非3和亚洲1型)口蹄疫病毒(FMDV)RNA；适用于口蹄疫病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(40T/Kit)
组份 数量 规格
荧光qRT-PCR反应液(FMDV-qRT-PCR MIX) 1管 560μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 40μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1 管 50μL/管
阳性对照(FMDV-PTC) 1 管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-18℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
（1） 猪病料：剪取50-100mg猪病料，加入装有500 µl PBS或生理盐水的研钵中缓慢研成匀浆，取匀浆液转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20sec；取上清备用。
（2） 动物血清、水泡液、淋巴结等标本以及细胞培养液：取样本至无RNA酶污染的离心管中备用。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
（1） 取灭菌的1.5 mL Eppendorf离心管，做好标识。
（2） 每管加入600 µL裂解液，分别加入被检样本200 µL，再加入200 µL*仿，混匀器上振荡混匀5 s，于4℃ 12000 r离心15 min。
（3） 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管，加入-20℃预冷400µL异丙醇，吸取步骤(2)各管中的上清液转移至相应的管中，避免吸出中间层，颠倒混匀。
（4） 于4℃ 12000 r离心15 min，弃上清，倒置于吸水纸上，沾干液体；加入600µL 75％预冷乙醇，洗涤。
（5） 于4℃ 12000 r离心10 min，弃上清，倒置于吸水纸上，沾干液体。
（6） 10000 r离心10 s，用微量加样器将其吸干，室温干燥5 min～10 min。
（7） 加入10µL 无核酸降解酶的水，溶解管底的RNA，5000 r离心5 s，冰上保存备用。若需长期保存须放置-70℃ 冰箱。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(FMDV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000r离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(FMDV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 real time RT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 5 min
预变性 1循环 94℃ for 30 sec
PCR扩增(PCR amplification ) 40循环 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(FMDV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明FMDV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明FMDV核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行FMDV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明FMDV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



北京现货猪蓝耳通用单重凝胶PCR检测试剂盒(PRRSV)品牌关键词：猪蓝耳通用单重凝胶PCR检测试剂盒(PRRSV),百奥莱博,SYA552


·玉米转基因Bt176单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA280
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽流感H7N9病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA151
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA214
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对手足口通用型特异性引物，一对手足口EV71型特异性引物，一对手足口CA16型特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对手足口通用型EV-U RNA、手足口EV71型RNA、手足口CA16型RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中手足口通用型的探针报告基团为CY5，手足口EV71型的探针报告基团为FAM，手足口CA16型的探针报告基团为HEX/VIC/JOE。

二、用途：
本试剂盒适用于检测各种脑脊液、咽拭子、粪便或肛拭子或疱疹液内的液体等。可用于手足口病病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
EV-U+EV71+CA16荧光反应液(EV-U+EV71+CA16-qRT-PCR MIX) 2管 456μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 30μL/管
阳性对照(EV-U+EV71 +CA16-PTC) 1管 30μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为9个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
1ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、病毒RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
6.2.1 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管，做好标识。
6.2.2 加入600 µL 裂解液，200 µL样本，200 µL *仿，混匀器上振荡5 s，4℃ 12000 rpm离心15 min。
6.2.3 吸取步骤6.2.2中的上清液转移至新的无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管中(避免吸出中间层)，加入400 µL 异丙醇，颠倒混匀。
6.2.4 4℃ 12000 rpm离心15 min，弃上清；加入600 µL 75％乙醇。
6.2.5 4℃ 12000 rpm离心10 min，弃上清。打开离心管管盖，室温干燥5 min-10 min。
6.2.6 加入10µL 无核酸酶水，溶解管底的RNA，5000 rpm离心5 s，-20℃保存。若长期保存需放置-80℃冰箱。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(EV-U+EV71+CA16-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 19µL N×19µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 20µL N×20µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入20μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(EV-U+EV71+CA16-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 50℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 3 min
PCR扩增 45循环 95℃ for 5 sec
55℃ for 60 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。设置为CY5、FAM和HEX/VIC/JOE。其中CY5基团检测EV-U，FAM基团检测EV71，HEX/VIC/JOE基团检测CA16。
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：EV-U、FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
（2） 阳性对照(EV-U+EV71+CA16-PTC)：EV-U、FAM和HEX/VIC/JOE通道均有扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） CY5通道：Ct值≤35手足口通用型病毒核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明手足口通用型病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明手足口通用型病毒核酸阳性；否则判为样本阴性
（2） FAM通道：Ct值≤35 EV71型手足口病病毒核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明EV71型手足口病病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明EV71型手足口病病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。
（3） HEX/VIC/JOE通道：Ct值≤35 CA16型手足口病病毒核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明CA16型手足口病病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明CA16型手足口病病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。




北京现货猪蓝耳通用单重凝胶PCR检测试剂盒(PRRSV)品牌关键词：猪蓝耳通用单重凝胶PCR检测试剂盒(PRRSV),百奥莱博,SYA552


·猪种布鲁氏菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA118
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·锦鲤疱疹病毒(KHV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA514
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·口蹄疫A型(FMDV-A)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA477
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·冠状病毒/博卡病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA190
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对冠状病毒型特异性引物，一对博卡病毒型特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法双重荧光RT-PCR 技术对冠状病毒/博卡病毒RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中冠状病毒型的探针报告基团为FAM，博卡病毒型的探针报告基团为VIC/HEX/JOE。

二、用途：
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子样品等临床样品中冠状病毒/博卡病毒的特异性检测。适用于冠状病毒/博卡病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
冠状病毒/博卡病毒反应液(HCOV/HBocaV-qRT-PCR MIX) 1管 576μL/管
qRT 酶混合物(qRT Enzymes MIX) 1管 192μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
冠状病毒/博卡病毒阳性对照(HCOV/HBocaV-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(HCOV/HBocaV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 12µL N×12µL
酶混合物 4µL N×4µL
总量 16µL N×16µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入16μL，向每管中加处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(HCOV/HBocaV-PTC)4μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 50℃ for 30 min
预变性 1循环 95℃ for 5 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 10 sec
55℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道，可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测HCOV，VIC/HEX/JOE基团检测HBocaV。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均无扩增。
(2) 阳性对照(HCOV/HBocaV-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效
8.3 结果判定
(1) FAM通道：Ct值≤35HCOV核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明HCOV核酸阴性。
Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明HCOV核酸阳性；否则判为样本阴性。
(2) VIC/HEX/JOE通道：Ct值≤35 HBocaV核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明HBocaV核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明HBocaV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

我公司强烈推荐动物疫病PCR检测试剂盒系列产品，热情期待您的咨询选购北京现货猪蓝耳通用单重凝胶PCR检测试剂盒(PRRSV)品牌。