北京现货第一条链 cDNA合成试剂盒(国产,进口)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货第一条链 cDNA合成试剂盒(国产,进口)，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货第一条链 cDNA合成试剂盒(国产,进口)
规格：50T
品牌：百奥莱博
编号：SY0290
产地：国产|进口
本试剂盒是基于Reverse Transcriptase，该酶热稳定性提高，在50℃的半衰期超过240min，且可长时间耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录，能稳定可靠地合成cDNA。且Reverse Transcriptase的独特设计，进一步增强了模板亲和力和行进性，使得全长cDNA的合成能力有了大幅度提升，可获得长达20 kb的cDNA，并且对于常见的逆转录抑制物具有更高的耐受度，非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。

本试剂盒包含由总RNA或mRNA合成高质量第一条链cDNA所需的所有成分，并提供两种cDNA合成引物：Random hexamers和oligo（dT）18。合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR、qPCR以及PCR克隆。其中，5×RT Mix包含优化的缓冲体系和dNTP； Enzyme Mix包含Reverse Transcriptase和RNase inhibitor。可根据需要，选择Oligo (dT)18、Random hexamers或基因特异引物作为逆转录引物。

试剂盒组分：

 

组份	规格
RNase free ddH2O	1 ml
5×RT Mix	200 μl
Enzyme Mix*	50 μl
Oligo dT18 (0.5 μg/μl)	50 μl
Random hexamers (N6)	50 μl
*包含RNase inhibitor，用于抵抗环境和体系中可能存在的痕量的RNase。

储存条件：-20℃，有效期一年。

质量控制

所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留。
功能检测1：以500 ng mouse total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增ne*(代"b")ulin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的20.0 kb条带。
功能检测2：以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应30分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测3：以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，55℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测4：以1 pg-1 µg HeLa cell total RNA为模板，以Oligo dT18和Random hexamers为引物，测试qRT-PCR性能。

以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。

客户需要准备的材料
1.RNase free的1.5 ml微量离心管或0.2ml PCR管
2.水浴锅或PCR仪
3.冰
4.RNA（高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。

引物选择
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo dT18，其与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）基因特异性引物 (GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
3）Random hexamers特异性最低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。

应用实例

1 第一条链cDNA合成*（以20μl反应体系为例）
1）按照下表在RNase free离心管中配制如下混合液：

RNase free ddH2O	to 20 μl
Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)	1 μl
or Random Primer	or 1 μl
or Gene Speicific Primers	or 2 pmol
5×RT Reaction Mix	4 μl
Enzyme Mix**	0.8-1μl
模板RNA	Total RNA: 50 ng-5 μg/mRNA: 5-500 ng

*可选步骤（一般不需要）：如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却 5min，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
** Enzyme Mix非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请瞬时离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。可每次按照0.8μl使用，不会影响使用效果。

2）用移液枪轻轻吹打混匀。
3）如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育30-50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育30-50 min。
4）65℃加热15 min(或者85℃加热5 min)失活Reverse Transcriptase。

2 RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。
1）建议反应条件
 

Components	Volume	Final Concentration
cDNA Template	2 μl	as required
Forward Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
Reverse Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
10×Taq Buffer (含Mg2+)	5 μl	1×
2.5 mM dNTPs	4 μl	0.2 mM
Taq DNA Polymerase	0.5 μl	2.5 units
ddH2O to final volume	50 μl	Not applicable

注意事项
1）所有操作均应在冰上进行。
2）除使用RNase free的枪头和离心管外，RNA实验用的试剂建议专用，并在单独的洁净的区域操作。操作时，戴上口罩和一次性手套，避免说话。总RNA提取完成后，建议取少量跑1%琼脂糖凝胶电泳，检验RNA的完整性。
3）逆转录反应抑制物包括酚，盐，SDS，EDTA等。建议用75%乙醇 (用DEPC水配制)仔细洗涤RNA沉淀 (轻弹管底让沉淀悬浮，并静置数分钟)。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。





北京现货第一条链 cDNA合成试剂盒(国产,进口)极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·PPARγ-GFP报告基因质粒
编号：SY0163
英文名称：PPARγ GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
PPARγ GFP Reporter Plasmid是用于检测PPARγ转录活性水平为目的的报告基因。PPAR(peroxisome proliferator-activated receptor)是调节靶基因表达的核内受体转录因子超家族成员，可分为α、β和γ三种类型。其中PPARγ主要表达于脂肪组织及免疫系统，与脂肪细胞分化、机体免疫及胰岛系统抵抗关系密切。

REPOTMPPARγ-GFP报告基因主要用于检测细胞PPAR 信号通路中PPARγ的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMPPARγ-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个PPARγ结合位点，可以高效地检测PPARγ的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得PPARγ-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGMPPARγ -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMPPARγ-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经吉满生物允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

·ERSE-GFP报告基因质粒
编号：SY0199
英文名称：ERSE GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
ERSE-GFP报告基因是用于检测ERSE转录活性水平为目的的报告基因。ERSE充当一个顺式作用元件调节内质网应激反应的转录应答。ERSE是包含NF-Y/CBF 和YY1转录因子结合位点的三重核苷酸序列。内质网应激反应元件结合因子（ERSF）复合体也是与ERSE核苷酸序列相互作用的。内质网应激在一些多发性疾病中具有关键的作用。

ERSE-GFP报告基因主要用于检测ER Stress信号通路、药物研究、基因过表达和RNAi的表型分子等。

pGMERSE-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个ERSE结合位点，可以高效地检测ERSE的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得ERSE-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM ERSE -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMERSE-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。


北京现货第一条链 cDNA合成试剂盒(国产,进口)关键词：First Strand cDNA Synthesis Kit,第一条链 cDNA合成试剂盒,SY0290

BTN60807 柱式无内毒素质粒DNAOUT Column Endo-free Plasmid DNAOUT
BL1385 SABC小鼠IgG-FITC kit
ARB12617 大鼠蛋白激酶B(PKB)定量分析 Rat protein kinase b,pkb ELISA KIT
ARB13060 小鼠肾素(RenIn)Elisa方法检测 Mouse renin ELISA KIT
2,4-二硝基*(代"*")甲*(代"酸") L-Lysine 610-30-0
ARB11073 人软骨寡聚蛋白(COMP)酶标法分析 Human cartilage oligomeric protein,comp ELISA KIT
ARB10364 人未磷酸化类胰岛素生长因子结合蛋白-1elisa检测说明书 Human non-phosphorylated insulin-like growth factor binding protein 1 ELISA KIT
PY01-149  异去氧胆酸  10克  
罗丹明123溶液  0.5mg/ml 100ul
ARB10029 人8异构前列腺素F2α(8-epI-PGF2α)尿液中含量检测 Human 8-epi-prostaglandin f2alpha,8-epi-pgf2α ELISA KIT
碱性磷酸酶缓冲液(pH7.5)   100ml|500ml
硅藻土 TEAC 91053-39-3
BTN101005 即用型易错PCR试剂盒 Instant Error-Prone PCR Kit
G-6-P脱*酶 Sephadex G-75 9001-40-5
北京现货第一条链 cDNA合成试剂盒(国产,进口)关键词：First Strand cDNA Synthesis Kit,第一条链 cDNA合成试剂盒,SY0290

ARB14198 大鼠超氧阴离子自由基(O2·)Elisa方法检测 
ARB12915 小鼠白血病抑制因子受体(LIFR)elisa检测说明书 Mouse leukemia inhibitory factor receptor,lifr ELISA KIT
TIANScript Ⅱ RT Kit 
10034-93-2 Hydrazine sulfate 硫*(代"酸")肼
BL0886 兔抗马IgG免疫血清
50-02-2 地塞米松 Dexamethasone
间硝基酚指示剂   100ml
HC0073 300ul吸头
腺嘌呤硫*(代"酸")盐 DL-Methionine 321-30-2
金属硫蛋白 Validamycin
BTN100828 高pH缓冲液套装 High pH Buffer Set
SJ0773 糖化酶
PY02-453  BIGGY琼脂  250克  
ARB14031 植物维生素B12(VB12)elisa检测操作说明书 Plant vitamin b12,vb12 ELISA KIT
ARB12197 大鼠半胱*酸蛋白水解酶(cAspAse-12)ELISA代测服务 Rat caspase ELISA KIT
58-22-0 Testosterone 睾酮(睾甾酮)
BTN81215 一站式Western印迹套装(显色法) One-Stop Western Blotting Pack
BL0958 胶体金标记兔抗豚鼠Ig抗体
无菌山梨醇-磷酸盐溶液(pH7.5)  1.2mol/L 100ml

北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购北京现货第一条链 cDNA合成试剂盒(国产,进口)。