生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)说明书在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)说明书
编号：YT031
英文名：Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)
规格：10次
品牌：百奥莱博
本试剂盒是一种通过随机引物标记反应产生生物素标记DNA探针的试剂盒。本试剂盒标记的生物素DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位杂交等。

在Klenow酶(Klenow fragment,3"-5"exo-)催化下，通过随机引物标记反应(random prime labeling)可以把生物素标记的Biotin-11-dUTP掺入到新合成的DNA探针中，这样就可以产生生物素标记的DNA探针。在随机引物标记反应过程中，一些标记好的DNA探针可以被Klenow酶从模板DNA链上驱赶下来。这样在模板量较少的情况下，通过随机引物标记反应，最后可以产生比模板DNA量更多的生物素标记DNA探针，可多达1-15倍左右。

本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记，包括DNA片段、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA片段应不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用百奥莱博的生物素3"末端DNA标记试剂盒(YT030)进行DNA探针标记。

用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng，推荐的模板用量为100ng-1μg。本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA，可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。生物素标记DNA可以使用百奥莱博的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当试剂盒进行检测。本试剂盒可以用于10个标记反应。

试剂盒组分：

 

Random Primer in Buffer(5X)	105μl
Klenow Fragment	11μl
Biotin-Labeling Mix	50μl
Ultrapure Water	1ml
Biotin-Control DNA(3ng/μl)	50μl
探针标记终止液	100μl

储存条件：-20℃。

使用说明：
1. 在一离心管或PCR管内加入100ng-1μg DNA模板，再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water，至总体积为34μl。(通常100-300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应)
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X)，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
3. 沸水浴加热5分钟，或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃，99℃加热5分钟也完全可以)。
4. 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2-3分钟。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
7. 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量，因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
8. 加入3μl探针标记终止液，混匀，终止标记反应。至此标记反应已经全部完成，标记好的DNA可以-20℃保存。
9. 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
10. 整个探针标记反应的流程参见下表：

100ng-1μgDNA模板	xμl
Ultrapure Water	(34-x)μl
Random Primer in Buffer (5X)	10μl
100℃ 5分钟，立即冰浴冷却
Biotin-Labeling Mix	5μl
Klenow Fragment	1μl
总体积	50μl
37℃孵育过夜
探针标记终止液	3μl
-20℃保存
此时可用于标记效率的检测及Southern、Northern等后续检测

11. 探针标记效率的检测：可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后，使用百奥莱博的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表：

模板DNA量	生物素标记DNA产量
—	孵育1小时	孵育20小时
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1350ng
100ng	350ng	1650ng
300ng	750ng	2200ng
1000ng	1300ng	2600ng
3000ng	1600ng	2600ng

注意：具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关，上表的数值仅供参考。
12. 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb，则生物素标记DNA产物的长度通常为100-1000bp，平均长度约为300bp左右。

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·胞苷酸激酶
编号：YT574
英文名称：(d)CMP Kinase (Crude Enzyme)
规格：100ml|1L
本酶为大肠杆菌表达的胞苷酸激酶，并经简单纯化获得的可以确保达到一定酶活力的粗酶液，用于特异性磷酸化CMP (or dCMP)。

外观：半透明黄色溶液
酶促反应：ATP + (d)CMP = ADP + (d)CDP
储存条件：-20℃，有效期1个月。

注意事项：
1. 由于本产品需新鲜制备，在您确认订购后约8个工作日才能发货。
2. 粗酶液的每次冻融均可能会引起部分失活，所以收到酶液后请根据需要进行分装，并置于-20℃或更低温度保存。
3. 随着保存时间的延长，酶活力会有一定程度的下降，收到产品后应尽快使用。
4. 本产品在生产和保存的过程中可能会有混浊或沉淀产生，融化后混匀即可，不影响正常使用。

·p53凝胶迁移探针(10μM)
编号：YT239
英文名称：p53 Probe For EMSA(10μM)
规格：30μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的p53consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的p53结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。一个包装的探针可以进行约90个同位素标记探针的反应，每次标记的探针可以测定约100个样品；或约可以进行60个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争，可以进行90-180个冷竞争反应。如果用于生物素标记探针的冷竞争时，可以进行约30个冷竞争反应。

p53 consensus oligo的序列如下：
5"-TAC AGA ACA TGT CTA AGC ATG CTG GGG ACT-3"
3"-ATG TCT TGT ACA GAT TCG TAC GAC CCC TGA-5"

本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记，也可以用于生物素标记。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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