大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 工具酶

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 工具酶，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 工具酶
产地：国产|进口
规格：500U
品牌：百奥莱博
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(DNA polymeraseⅠ)，1956年由Arthur Kornberg首先发现的DNA聚合酶，又称Kornber酶。纯化的DNA polⅠ由一条多肽链组成，约含1000个*基酸残基，分子量为109KD。含有一个二硫键和一个-SH基。


图注：左图为Klenow片段，右图为大肠杆菌DNA聚合酶Ι

产品组成：

 

成份	规格
DNA聚合酶I(10000U/μL)	50μL
10×工具酶通用缓冲液	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

产品特点：
1．除具有5´→3´DNA聚合酶功能，还具有5´→3´外切酶活性，3´→5´外切酶活性，焦磷酸解作用和焦磷酸交换作用。
2．可应用于切口平移和cDNA第二链合成。
3．本品不含DNase I，因此切刻平移反应时需额外添加 DNase I。

单位定义：1单位指37℃条件下，30分钟内能催化10nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

反应条件：1×Buffer [10mM Tris-HCl，50mM NaCl，10mM MgCl2，1mM DTT(pH7.9@25℃)]。加入dNTPs(不随酶提供)。

Buffer成分：25mM Tris-HCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50% Glycerol，pH7.4 @25℃

热失活：75℃ 20分钟。

大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 工具酶极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(中pH)
编号：BTN81212B
英文名称：One-Stop Protein Native PAGE Pack(B)
规格：30次
非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一，跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同，它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同，所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐，为此本公司开发了本产品。

产品特点：
1．即开即用，不需单独准备各种成分，十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺
2．非变性，电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用，得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3．可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5．提供具有3种不同pH的缓冲液套装，便于客户选择最适合的缓冲液体系。

产品组成：

成分	规格
丙*(代"烯")酰胺干粉	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉	3g
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵干粉	1g
高中低缓冲液套装选一	ABC之一(见下)
说明书	1份
高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分)
高pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
高pH分离胶配胶液(pH8.9)，4×	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
高pH上样液，5×	1ml
中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分)
中pH浓缩胶配胶液(pH5.5)，4×	100ml
中pH分离胶配胶液(pH7.5)，4×	200ml
中pH电泳液(pH7.0)干粉A	55.2g
中pH电泳液(pH7.0)干粉B	10g
中pH上样液，5×	1ml
低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分)
低pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
低pH分离胶配胶液(pH4.3)，4×	200ml
低pH电泳液(pH4.5)	10L(干粉)
低pH上样液，5×	1ml

注：高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液，只是pH不同。

储存条件：常温运输和保存(上样液需-20℃保存)，保存期为一年。

使用方法：
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶，高pH分离胶，高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液，电泳液，配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要，缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI，则蛋白质分子带电多(电荷密度大)，电泳速度快，分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性，失去活性，所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡，需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定，没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5，所以在不知道目标蛋白的pI时，可以先选用高pH缓冲系统。

一、配制分离胶
1．确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质，可选用3-5%的胶；对分子量在20-150KD之间的蛋白质，可选用5-10%的胶；对分子量在10-80KD之间的蛋白质，可选用10-15%的胶。对未知样品，建议使用7.5%的胶。
2．配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液，该溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
4．配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。注意：如果购买的是低pH缓冲系统，由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述两成分的用量。
7．在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水，使胶顶部液面平整。由于比重不同，水和丙*(代"烯")酰胺溶液不会混合。
8．室温聚合30-60分钟后，用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。

二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率，适合于成分复杂的样品，一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同，蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品，可以不用浓缩胶，此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度，尺寸和形状相关。)
1．配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4．在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
5．室温聚合30-60分钟，拔出梳子，用1×电泳液冲洗加样孔。

三、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注：本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种，低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液，可以室温放置，用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH，但保险起见，可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3，7.0和4.5。
 注意：中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液，否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A，5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀，加去离子水至彻底溶解，调PH7.0，定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2．连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI，目标蛋白将带负电荷并向阳极移动，可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极)；如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI，目标蛋白将带正电荷并向阴级移动，此时应该下阴极上阳极。
3．300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫*(代"酸")铵。
4．换电泳液。
5．在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl，1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意：如果用考染检测，每个孔的蛋白最好在50-100μg总蛋白，如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀，可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA)，用前最好用pH试纸测试一下，不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6．上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7．用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意：电泳过程最好在冷室或有冷却系统，以免电泳产热使蛋白质变性。
8．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。


大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 工具酶关键词：E.coli DNA Polymerase I,大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ,BTN130430

ARB12086 大鼠水通道蛋白2(AQP-2)定量分析 Rat aquaporin 2,aqp-2 ELISA KIT
ARB13795 豚鼠肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)含量检测 Guinea pig intestinal fatty acid binding protein,ifabp ELISA KIT
HC0261 Eppendorf大容量电动移液器
乙酸纤维素 Sodium 4-amino-1-naphthalenesulfonate 9004-35-7
十二烷基三甲基*化铵 4-Nitrophenyl palmitate 1119-94-4
胃蛋白酶(猪胃粘膜) Silver acetate 9001-75-6
邻*二酚紫指示剂   100ml
PY04-050  磺胺嘧啶*  12mg/支×10支  每支添加于100ml亚硫*(代"酸")盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础(SPS)培养基中，用于产气荚膜梭菌的平板计数
FMOC-L-色*酸 D-Pyroglutamic acid 35737-15-6
甘*酸乙酯盐*(代"酸")盐 Magnesium dodecyl sulfate 623-33-6
PY04-021  新生霉素  4.5mg/支×10支  每支添加于225 ml改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB)，用于食品和动物饲料中大肠杆菌0157的增菌培养
ARB10603 人血吸虫(scHistosomA)ELISA代测服务 Human scHistosoma ELISA KIT
ARB11138 人肿瘤坏死因子α(TNF-α)检测服务 Human tumor necrosis factor α,tnf-α ELISA KIT
ARB11711 人黑素瘤衍生亮*酸拉链额外核因子(MLZE)免费代测 Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor,mlze ELISA KIT
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 工具酶关键词：E.coli DNA Polymerase I,大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ,BTN130430


·柱式真菌DNA提取试剂盒(玻璃珠法)
编号：BTN100303
英文名称：Fungus DNA Column extraction kit(Glass bead method)
规格：50次
真菌DNA提取是一个难题，一是因为真菌有菌丝体、孢子等多种完全不同的结构形态，二是因为其细胞壁一般都很厚，比较难以破碎。本产品是液氮研磨法柱式真菌DNA提取试剂盒的姊妹产品，它利用玻璃珠法破碎细胞，主要用于从真菌孢子和液体培养的真菌细胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNA提取试剂盒采用液氮研磨法破碎细胞，适用于从真菌菌丝体中提取其基因组DNA)。

产品特点：
1. 即开即用，提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA。
3. 本方法提取一个样品只需要10余分钟，方便、快速和高效。
4.一次可以处理5mL的过夜真菌培养物，所得的基因组DNA OD260/OD280一般都在1.8左右，长度一般在20 kb左右，每mL菌液的DNA产率一般在1-3ug。可以直接用于PCR和酶切等后续试验。

试剂盒组成：

成成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	75ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
酸洗玻璃珠，400μm	25g
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，保存期为一年。

使用方法：
1. 对菌液：取3-5mL过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约50mg)，转移到装有1mL水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料，一般取0.1g左右，直接加入到离心管中，然后进入下一步操作。
4.在材料中加入无菌水1mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
5.沉淀中加入500μl溶液A和0.5克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟。
6. 加入500μL的溶液B，涡旋震荡3分钟，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个5mL的干净的塑料离心管中。或者每管0.3mL，分别转移到2-3个1.5mL的干净的塑料离心管中。
7.在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
8.在离心吸附柱中加入500μl通用洗柱液，12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液。
9. 重复上步操作一次。
10. 12000rpm空柱离心1分钟。
11. 加入50-100μl DNA洗脱液2.0，室温放置1分钟以上，12000rpm离心1分钟，穿透液即为真菌DNA样品。
12. 为了得到更多的DNA样品，可以重复上步操作1-2次。
13. 所得DNA即可立即使用或放冰箱长期保存。

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