BTN111207A型动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)现货供应

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百奥莱博专业生产销*(代"售")BTN111207A型动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)现货供应，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：BTN111207A型动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)现货供应
规格：5次
英文名：Animal Mitochondria Purification Kit(A)
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：BTN111207A
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．最后用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，最后再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．最后用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。

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·*仿-异戊醇混合溶液
编号：BTN100804
英文名称：Chloroform-Isoamyl Alcohol
规格：250mL
本品是*仿和异戊醇的24:1混合液，主要用于处理用饱和酚抽提过的核酸或蛋白质溶液，去除其中残留的酚。

储存条件：常温运输和保存、避光。有效期一年。

疑难解答：
Q：酚抽提后一定要用*仿抽提吗？
A：是。酚跟水互溶，所以用饱和酚抽提过的水相中还有残留的酚，如果直接从中沉淀核酸，酚就会污染样品，抑制很多后续的反应。如果再用*仿抽提，则可以去除残留的酚，因为*仿非极性很强，比重大，可以把水相的酚萃取出来并且离心时使有机相(酚*仿混合物)相处于下层，方便吸取位于上面的水相(乙*(代"醚")曾经用于此目的，但比重轻，不好取水相，所以现在基本没人使用)。
Q：异戊醇的作用为何？
A：用于消除振荡中形成的泡沫。


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·糖原PAS染色液(真菌专用)
编号：BTN130630
英文名称：Glycogen PAS stain (for fungi)
规格：3×50mL
糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该技术不仅能显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1，2-乙二醇基，使之变为二醛，醛与Schiff 试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间，使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化，这是很关键的步骤。

本公司糖原PAS染色液(真菌专用)利用真菌含有多糖，过碘酸氧化真菌壁上的多糖而暴露出醛基，醛基与无色Schiff 结合呈现红色。

产品特点：
➤染色稳定。
➤特异性强。
➤ 操作简捷，仅需半小时。
➤浓度低过碘酸更适用于对真菌染色，无盐*(代"酸")乙醇分化液分化步骤。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	50ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，溶液A和溶液B需4℃避光保存，溶液C可室温避光密闭保存，有效期6个月。

使用方法：(以下步骤仅供参考)
1．常规固定(常采用10%福尔马林)，常规脱水包埋。
2．细胞涂片入蒸馏水(无需包埋、脱蜡)或组织切片脱蜡入蒸馏水。
3．入溶液A(过碘酸溶液)中，室温氧化10min。
4．自来水冲洗2次，蒸馏水浸洗2次。
5．入溶液B(Schiff Reagent)并加盖，置于室温阴暗处浸染10～20min。
6．溶液C滴洗2次，每次2min。
7．流水冲洗2min。
8．逐级常规乙醇脱水。二甲*透明，中性树胶封固。

染色结果：

真菌	紫红色
细胞质	深浅不一的红色

备注：颜色深浅很大程度上取决于样品在过碘酸溶液和Schiff Reagent中作用时间的长短。

阴性对照(可选)：
1．取淀粉酶1g 溶解于PBS(pH5.3)100mL，处理30～60min，与其他样本共同入溶液A。结果应为阴性。
2．(备选方案)取唾液片(过滤后用)处理30～60min，与其他样本共同入溶液A。结果应为阴性。
3．(备选方案)如果对照片采用其自身样本，对照片不经溶液A这一步，直接入溶液B。结果应为阴性。

注意事项：
1．溶液A(过碘酸)氧化时间不宜过久，氧化时的温度以18～22℃最佳。
2．溶液A、溶液B使用时避免接触过多的阳光和空气，使用前最好提前30min取出恢复至室温，避光暗处使用。
3．如常规切片建议用糖原PAS染色液，因为其过碘酸溶液和苏木素溶液浓度都相对高。
4．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


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·dUTP溶液，100mM
编号：BTN131038
英文名称：dUTP Solution，100mM
规格：0.4mL
dUTP(2"-脱氧-5´-三磷酸尿苷)在PCR和RT-PCR反应中替代dTTP，从而可以防止前面扩增的干扰。PCR反应中dUTP替代dTTP，导致产物中含有尿嘧啶，这种掺入适用于很多应用。将尿嘧啶-N-糖基酶 UNG(有时称为UDG)加入到PCR反应中，可切除任何污染PCR产物的尿嘧啶，从而避免假阳性的形成。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·中pH缓冲液套装
编号：BTN100829
英文名称：Medium pH Buffer Set
规格：30次
Native-PAGE，非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳是目前电泳法分离非变性蛋白质的主要方法，实验过程杜绝变性剂接触目的蛋白质，常用于同工酶的鉴定和提纯。本产品可快速制备分离胶，不含SDS，并确保配制分离胶的精确pH值。

产品组成：

成份	规格(30次*)
4×浓缩胶配胶液(pH5.5)	100ml
4×分离胶配胶液(pH7.5)	200ml
中pH电泳液(pH7.0)	10L(干粉)
5×中pH上样液	1ml
使用手册	1份

*注：1次是指的一次mini-Gel电泳

储存条件：常温运输及保存(5×中pH上样液需要-20℃保存)，有效期为一年。

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