细胞核微量制备试剂盒厂家价格

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名称：细胞核微量制备试剂盒厂家价格
规格：50次
编号：BTN100601
英文名：Nuclei Miniprep Kit
产地：国产|进口
用高密度介质来分离动物软体组织(如肝脏、脾脏等)细胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau于1956年发明，其原理是细胞核的密度较大，在高速离心条件下(40000g 1小时)可在高密度介质(2.2mol/l 蔗糖溶液)中沉降下来，从而达到与细胞质其它成分分开的目的。该方法能通过一步离心得到较高纯度的细胞核，得到广泛应用。本产品就是在Chauveau方法的基础上优化改进而来。

产品特点：
1．基于密度梯度分离，可有效去除细胞质及其他细胞器，得到的细胞核纯净。
2．加进*化*、*化*、*化*(代"*")等改变分离介质渗透压的物质，减少了细胞核的脆性，增加了细胞核的完整性。
3．精心调节了介质的pH，防止细胞核在分离过程中的聚集，还能保持细胞核的精细结构。
4．快速，整个操作过程仅需1小时即可完成(对一个样品而言)。
5．提供染色试剂，可以在普通光学显微镜下检测纯化的细胞核的纯度。
6．处理温和，得到的细胞核中的大部分蛋白质都具有活性，可以用于胶迟阻实验、酶活性分析细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究；也可用于超大片段DNA的纯化。
7．不但适用于动物和植物培养细胞，还能用于实体组织(能用Dounce或Potter 匀浆器匀浆的组织均可)。
8．一次微量提取足够处理0.1 克组织或10E7个培养细胞，本产品足够50次微量提取。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A成分一	100ml
溶液A成分二(干粉)	约20g
溶液B成分一	50ml
溶液B成分二(干粉)	约100g
细胞核染色液	1套
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：

一、准备工作：先将溶液A的成分二(干粉)全部加入到溶液A成分一(溶液)中，摇晃溶解后得到100mL溶液A。将溶液B的成分二(干粉)全部加入到溶液B成分一(溶液)中，摇晃溶解后得到50mL溶液B。4℃放置不能超过2 天，长期放置需要放-20℃。

二、微量细胞核分离(放量提取各试剂的用量可以按比例放大)：
1．对组织细胞：称取100～200mg 新鲜组织(如动物肝脏、脑、心肌和植物叶片等)，用自备的PBS或生理盐水洗净血水，滤纸吸干，用剪刀或刀片将其剪为碎块(最好大小为1cm3，过小反而不利于匀浆)放入小容量Dounce或Potter 玻璃匀浆器内。
2．对培养细胞：用自备胰酶按标准方法消化培养细胞，PBS 洗涤，800×g 5～10分钟离心收集细胞，计数。每次微量提取需要5×10E7个细胞，加入1.0mL预冷的溶液A重悬细胞，然后转移到小容量Dounce或Potter 玻璃匀浆器内
3．用Dounce或Potter 组织匀浆器在冰上破碎组织或细胞。如果用手动匀浆器，一般需要20～30次。如果用电动匀浆器，一般需要处理3-5次，每次5～10秒钟(转速为500r/min)。
4．将匀浆液转移到离心管中。如果匀浆液有可见的结缔组织和未破碎的组织块，可以用三层自备的纱布放在1.5mL离心管管口，将匀浆液过滤进入离心管。可取少量滤液涂在载玻片上制得涂片A，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
5．4℃，700-800×g 水平离心5-10分钟。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。可取少量上清液涂在载玻片上制得涂片B，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
6．加入0.5mL预冷溶液A重悬沉淀。用预冷的匀浆器(用前需要将表面的组织洗去)重悬沉淀。可取少量上清液涂在载玻片上制得涂片C，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
7．在水平型离心管中加入0.5mL预冷的溶液B，然后靠管壁慢慢加入上步得到的重悬液。
8．在4℃ 23000g离心30分钟，管底的沉淀即为细胞核。
9．小心吸弃上清液。注意：上清一般比较粘稠，最好倒立一段时间。
10．用0.5mL溶液A重悬沉淀。
11．在4℃ 1500g离心5分钟，吸弃上清，沉淀即为纯净的细胞核。可以直接使用，也可以加等体积的自备甘油，混匀后放液氮或-70℃保存。可取少量上悬浮液涂在载玻片上制得涂片D，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
12．用本方法一般可以从0.1g 肝脏组织中纯化到1-2×107个细胞核。如果后续试验是Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解细胞核后上样。

三、显微镜检测涂片，计算效率
1．将干燥后的A-D 四张涂片加入固定液固定15分钟，晾干。
2．Giemsa 染液染10分钟。
3．自备蒸馏水漂洗数秒，用滤纸吸干水。
4．用显微镜(40×)检查涂片，细胞核将呈紫红色，混杂的细胞质为浅蓝色碎片。根据每步细胞核的数量可以粗略估计回收效率。

疑难解答：
本说明书强烈建议用离心力g 而不是转速计算所需的离心速度，因为不同的离心机转子直径不同，即使是同一转速，其离心力也不同。如果只知道转速，可用下式计算离心力。
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G为离心力，一般以g(重力加速度)的倍数来表示；[rpm]２即转速的平方；
R为离心机转子的半径(单位为厘米)。

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·Carnoy固定液
编号：BTN131225
英文名称：Carnoy Fixative Solution
规格：250mL
Carnoy固定液是由乙醇、*仿和乙酸，按照6:3:1的比例混合而来的混合型固定液。该液渗透快速，固定只需1-2小时。固定后可以直接用95%乙醇脱水，固定核酸和糖原的效果很好。Carnoy固定液是组织化学最常用的固定液之一。

产品特点：
1．适用于一般植物组织和细胞的固定，常用于根尖，花药压片及子房石蜡切片等组织的固定。
2．有极快的渗透力，根尖材料固定15-20分钟即可，花药则需1小时左右。固定时间一般只需1-2小时，最多不超过24小时。

储存条件：常温运输及保存，保存期为一年。

使用方法：
1．标本修块，置入本产品内固定1～2小时(根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异)，固定时间一般最多不超过24小时。
2．固定后用95%乙醇洗涤。如果材料不是立即使用，需转入70%酒精中保存。


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·蓝色DNA上样液(6×,非甘油)
编号：BTN130958B
英文名称：DNA Loading Buffer(Blue)
规格：10mL

·农杆菌LBA4404化学感受态细胞
编号：BTN140385
英文名称：E.coli LBA4404 Chemical Competent Cell
规格：10×100μL
 本产品为LBA4404农杆菌化学感受态细胞，其具有利福平和链霉素抗性，适用于玉米、烟草等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达103cfu/μg。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等

使用方法：

转化前准备
1.冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3.将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1.取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2.无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1ug质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置10分钟。
3.将离心管置于液氮中速冻5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4.迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5.加入800μl无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2~3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6.5000rpm离心1分钟收菌，保留100μL左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。

·噻孢霉素溶液
编号：BTN120684
英文名称：Cefotaxime Solution
规格：1mL
本产品为浓度100mg/mL的噻孢霉素水溶液。参考浓度50mg/mL。噻孢霉素(头孢噻肟*)分子式为：C16H16N5NaO7S2，分子量：477.45，CAS号：64485-93-4。效价：916-964μg/mg，溶于水。噻孢霉素为β-半乳糖苷酶抑制型抗菌素，能抑制肽聚糖的交联，从而抑制细菌细胞壁合成，常用于植物组织培养中抑制农杆菌。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。


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SJ0356 Inositol   肌醇
F020222 山羊抗人IgGxIgMxIgA抗体 Goat Anti-Human IgGxIgMxIgA
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Pollak三色染色液   4×50ml|4×100ml
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Sorensen磷酸缓冲液(1×,pH6.2)   500ml
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