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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
477
- 英文名:
Plant Total Protein Miniprep Kit (SDS-PAGE)
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)厂家
编号:BTN81218
规格:30次
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:Plant Total Protein Miniprep Kit (SDS-PAGE)
本产品用于快速提取微量植物蛋白,用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。
产品特点:
1.可以处理各种植物材料,包括新鲜或冻干的材料。
2. 操作简单。
3. 能有效去除植物样品中常见的污染。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 30ml |
| 溶液B | 240ml |
| 溶液C | 1.5ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
使用方法:
1.称取植物样品。如果是冰冻干燥的样品,称取50mg。如果是新鲜组织样品,称取100mg。在液氮条件下,用研钵充分研磨成为粉末。
2.将研磨得到的粉末转移到1.5mL的塑料离心管中。
3.加入1mL溶液A,在震荡仪上充分震荡5分钟。
4.室温12000g离心5分钟,组织残渣碎片将形成沉淀。
5.将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中,在沸水中处理3分钟。
6.冷却至室温后,转移到一个10-15mL塑料离心管中,加入8倍体积的-20℃预冷的溶液B。
7.颠倒混匀后,置于-20℃冰箱中至少60分钟以充分沉淀其中的蛋白质。
8.12000g离心15分钟,去上清液,保留蛋白沉淀。
9.室温晾干之后,加入50μL溶液C并在震荡仪上充分震荡以让蛋白沉淀充分溶解
10.将蛋白溶液在沸水中处理3分钟。
11.室温12000g离心5分钟,上清可以直接用于蛋白浓度测定和SDS-PAGE。
关于北京现货植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)厂家的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
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北京现货植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)厂家关键词:BTN81218,植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用),Plant Total Protein Miniprep Kit (SDS-PAGE)
·Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH8.0)(不含RNase)
编号:BTN70607
英文名称:RNase-Free Tris-HCl Solution
规格:250mL
·动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)
编号:BTN71201
英文名称:Animal RNA column extraction kit(Trizol)
规格:50次
本试剂盒是动物总RNA快速提取试剂动物RNA提取试剂盒(BTN3070)的柱式升级产品,可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。
试剂盒特点:
1. 操作更加简单快速,整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. RNA 纯度更高,OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
4.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式RNA提取产品。
试剂盒组成:
| 成分 | 50T |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 25ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| RNA 洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的,如果处理样品量大,请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。
1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用:
a)对贴壁细胞:吸尽培养液,在每10 平方厘米细胞中加入1mL溶液A,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL溶液A,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell,1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织:先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中,每50-100mg 组织加1mL溶液A,用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A,否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold 保存组织:先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块,其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中,然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL溶液A需0.2mL *仿),振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000rpm室温离心3~5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL的无色透明水相,有时水相比重大时,水相在下层,有机相即蓝相在上层,吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意:离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见,可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行,否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B,充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加0.3mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。
10.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中,加入50-100μL RNA 洗脱液。
12.室温12000 rmp离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的电泳检测:本试剂盒提取的RNA 最好用甲醛变性胶电泳,如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳,一定要使用RNA 专用上样液RNAload(操作详见RNAload 使用手册),千万不要使用常用的DNA上样液,因为DNA上样液没有经过去RNase处理,也不能将RNA变性,得到的带型将十分杂乱。
14. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。
15. RNA产量产率测定:将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA 纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
疑难解答:
Q:上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗?
A:不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象,我们初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物,加RNase处理后,这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象,建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如RNAload)。
Q:如何确认和去处除污染的基因组DNA?
A:如果怀疑有DNA污染,可以用RNase处理RNA样品,然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失,则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase,由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染,所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。
北京现货植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)厂家关键词:BTN81218,植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用),Plant Total Protein Miniprep Kit (SDS-PAGE)
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北京百莱博科技有限公司是蛋白质研究产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购北京现货植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)厂家。
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