AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)哪里买

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百奥莱博专业生产销*(代"售")AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)哪里买，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)哪里买
英文名：AFLP Kit(EcoRI-MseI)
品牌：百奥莱博
规格：1600次
产地：国产|进口
本产品在传统AFLP-PCR的基础上经过精心优化而开发。AFLP(amplified fragment length polymorphism)原理是一种结合RFLP和PCR技术特点的、迄今为止最有效分子标记分型技术，其原理如下：


产品特点：
1．一站式，足够50次酶切-连接反应、50次预扩反应和1600次AFLP PCR(PCR按30μL体系计算)，但不包括DNA 纯化和带型分析试剂(如PAGE电泳试剂和银染试剂)。
2．本系列产品提供EcoRI-MseI 组合，适用于GC含量在50%以上的基因组。对GC含量在50%以下的基因组，需从本公司采购AFLP(EcoRI-TaqI)组合。
3．各种参数都经过优化，一次PCR所得AFLP片段数一般在10-100之间，可重复性好，误差小于0.6%。
4．本产品适用于基因组在500 Mb-6000Mb的材料(如动物和植物)，对于基因组在50-500Mb的材料(如细菌和真菌)或50Mb以下的材料(如质粒，cosmid，BAC，YAC和PAC等)，需要分别另购专门的+1型预扩引物混合液和+3型EcoRI引物(8 种)AFLP引物对。

试剂盒组成：

 

成分	规格
酶切-连接Buffer，10×	100μl
EcoRI-MseI酶混合液	100μl
EcoRI-MseI 接头混合物	1ml
T4 DNA连接酶(1U/μL)	50μl
+0型预扩引物混合液	750μl
PCR Mix 3.0	9ml×3
对照DNA(50ng/μL)	20μl
+2型EcoRI引物(8条)	1ml每种
+3型MseI引物(8条)	1ml每种
TE溶液，pH8.0	10ml
超纯水	10ml
说明书	1份

+2型EcoRI引物和+3型MseI引物最后碱基的序列

引物名称	8条引物3´最后碱基
+2型EcoRI引物	-AA,-AT,-AG,-AC,-TA,-TT,-TG,-TC
+3型MseI引物	-CAA,-CAC,-CAG,-CAT,-CTA,-CTC,-CTG,-CTT

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：Southern级DNA纯化试剂，尿素-PAGE电泳套装，银染试剂盒。

使用方法：

一、DNA提取(本试剂盒不提供相关试剂)
用户需要自备50-500ng Southern级别的基因组DNA，用前最好预实验以确保DNA能够被EcoRI和MseI内切酶彻底切开。

二、限制性酶切和接头连接反应(本试剂盒足够50次本反应)
1．在0.2mL离心管中加入设置20μL的限制性内切酶酶切体系：

成分	用量
酶切-连接Buffer，10×	2μl
样品DNA	50ng(对小基因组材料) 500ng(对大基因组材料) 如果用对照，则用5μL
EcoR I-Mse I酶混合液	2μl
超纯水	加水到20μl

2．轻柔混匀并短暂离心后，37℃保温2小时酶切(若PCR 仪器不带热盖，则必须加50μL自备石蜡油，否则水分会蒸发影响反应。下同)，70℃保温15分钟灭活内切酶。
3．在上述酶反应体系中加入20μl EcoRI-MseI 接头混合物和1μl T4 DNA连接酶，轻柔混匀并短暂离心后，20℃保温2小时让接头跟DNA片段相连。
4．在一个离心管中加入10μl上步得到的连接反应液和90μL TE缓冲液，pH8，充分混匀，得到酶切-连接反应10倍稀释液，未用完的酶切-连接反应原液(30μL)可放-20℃保存。

三、预扩增(本试剂盒足够50次本反应)
5．在0.2mL离心管中设置30μl的PCR 体系：

成分	体积
酶切-连接反应液10倍稀释液	5μl
+0型预扩引物混合液	10μl
PCR Mix 3.0	15μl

6．离心数秒，按下列参数进行PCR预扩增：

	温度	时间
PCR(20次)	94℃	30s
	56℃	60s
	72℃	60s

7．可以取10μl PCR产物在1.5%琼脂糖胶上电泳检测，产物为100-1500bp 模糊条带。
8．将剩下的预扩反应液用TE 稀释50倍，直接用于下步反应或放-20℃保存待用。

四、选择性PCR扩增(本试剂盒足够至少1600次本反应)
9．在0.2mL PCR 管中，加入下列成分(如果用户已经知道哪个一种或几种引物组合适合自己的材料，则直接使用；如果不知道，则需要预先测试所有64 种组合，设置64个PCR反应)，下面只是一种组合：

成分	体积
预扩反应液50倍稀释液	5μl
+2型EcoR I引物之一(八种之一)	5μl
+3型Mse I引物之一(八种之一)	5μl
PCR Mix 3.0	15μl

10．轻柔混匀后离心数秒，按下列参数进行PCR：

	温度	时间
PCR(13次)	94℃	30s
	65℃	30s(每次循环递减0.7℃)
	72℃	60s
PCR(13次)	94℃	30s
	55℃	30s
	72℃	60s
延伸	72℃	5min

五、尿素-PAGE电泳和银染(需另购试剂并按相关说明书进行)

我公司的AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)哪里买，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
BTN130527 哺乳动物专用蛋白酶抑制剂 Protease Inhibitor for Mammal
Gill苏木素染色液(Gill No.1)   100ml|500ml
ARB12928 小鼠皮质酮(CS)代做ELISA实验 Mouse corticosterone,cs ELISA KIT
2244-11-3 四氧嘧啶 Alloxan Momohydrate
HC0350 BRAND 大容量电动移液器
SJ0795 亲和硅烷
血红蛋白检测试剂盒(微板法)   100T
PL0301 高纯度质粒小量快速提取试剂盒(离心柱型)
ARB11816 人膜联蛋白V 含量测试 Human annexin-Ⅴ ELISA KIT
ARB10764 人抗IgE受体抗体酶标法分析 Human anti-ige receptor antibody ELISA KIT
ARB10204 人β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA检测服务 Human β2-glycoprotein 1 antibody iga/g/m,β2-gp1 iga/g/m ELISA KIT
PY04-103  维生素K1  2.5mg/支×10支  每支添加于100ml 灭菌冷却至50℃的PYG培养基基础中  培养双歧杆菌用于有机酸代谢产物的测定
ARB13720 兔诱导型一氧化*(代"氮")合成酶(INOS)Elisa分析 Rabbit inducible nitric oxide synthase,inos ELISA KIT
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·真菌总蛋白质微量提取试剂盒
编号：BTN81202
英文名称：Fungal Total Protein Miniprep Kit
规格：50次
本产品专门用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法，适合于各种形态的各种酵母材料。

产品特点：
1．破壁效率高，能达到80-90%。
2．可以处理各种酵母样品。
3．操作简单，得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分析。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B成分一	50ml
溶液B成分二	1.5g
玻璃珠，400μm	5g
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存(溶液B成分二需-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
准备工作：将溶液B成分二(干粉)全部加到50mL溶液B成分一中，充分摇晃使之全部溶解，成为溶液B，然后分装成小分(体积根据每次实验的样品数决定)并放-20℃长期保存。

1．将酵母细胞接种到5mL YPD培养基中，30℃摇晃(250rpm/分钟)过夜培养使其OD600达到0.5～2.0。
2．把酵母细胞培养物转到装有2mL预冷溶液A的10-15mL离心管中，混匀。
3．4℃，5000g离心5分钟沉淀酵母细胞，吸出上清液。
4．用30μL溶液B悬浮酵母细胞，并快速转移到1.5mL塑料离心管中。
5．100℃下保温3分钟，使蛋白酶失活，样品存放于-20℃。
6．加入0.1g的玻璃珠。
7．在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。
8．加入70μl溶液B，稍加振荡，置100℃保温1分钟。
9．取5-20μl抽提液上样直接进行SDS-PAGE凝胶电泳。


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·10×TBE电泳液
编号：BTN90313
规格：250mL

·革兰氏阴性菌DNA提取试剂盒(百万碱基级)
编号：BTN130948
英文名称：Gram negative bacteria DNA extraction kit(millions of base)
规格：10次

·Taq DNA连接酶
编号：BTN130621
英文名称：Taq DNA Ligase
规格：1000U
Taq DNA连接酶能够催化磷酸二酯键的形成，使杂交到同一互补靶DNA链上的两条契合寡核苷酸链的5´-磷酸末端和3´-羟基末端通过磷酸二酯键连接。这个连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶DNA完全配对并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此，可以用它来检测单碱基替换。在45℃～65℃范围内，Taq DNA连接酶均有活性。

产品特点：
1．耐热性好；
2．可在PCR和连接酶链式反应过程中掺入磷酸化寡核苷酸；
3．可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测；
4．可通过 PCR扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位是指在50μL反应体系中，45℃反应条件下，15分钟能使50%的12bp粘性末端片段发生连接所需要的酶量。12bp粘性末端来自于BstEII消化1μg λDNA。

北京百莱博科技有限公司专业生产基因结构和功能产品，欢迎来电咨询选购AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)哪里买。