藻类RNA柱式提取试剂盒厂商

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博供应的藻类RNA柱式提取试剂盒厂商用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多藻类RNA柱式提取试剂盒等RNA纯化产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：藻类RNA柱式提取试剂盒厂商
规格：50次
编号：BTN120503
品牌：百奥莱博
英文名：Algae RNA Column extraction kit
产地：国产|进口
本试剂盒是专门用于各种藻类样品RNA提取的产品。

试剂盒特点：
1. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
2. RNA纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等。
3. RNA产量高，一般在20-70μg/mL液体藻类培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
溶液D	30ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将1-5mL液体藻类培养物在1.5mL塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心 1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.5mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入0.5mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。注意：不要超过5分钟，否则RNA容易降解。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的1.5mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入0.2mL自备的*仿，充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3～5分钟，转移上清液到一自备的、干净的5-10mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(约1mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为1mL，则加入3mL溶液C和1mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移0.7mL混合液到离心吸附柱中，室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入0.7mL混合液，重复上面的操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将0.7mL通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL RNA洗脱液。具体加多少根据RNA浓度决定，建议先使用小体积洗脱液，这样浓度过高还可以稀释。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测：
 注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
 将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE(pH7.5-8.2之间)中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD比值没有意义。

藻类RNA柱式提取试剂盒厂商正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：
BL0826 HRP标记兔抗HRP抗体
D-葡萄糖-6-磷酸单*盐 Hematoxylin 54010-71-8
胆碱酯酶(ChE)检测试剂盒(羟胺*化铁比色法)   50T
ARB10349 人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量测试 Human secretory immunoglobulin a,siga ELISA KIT
磷钨酸* GAPDH 51312-42-6
氧化金 Alu-Gln 1303-58-8
ARB11400 人神经科粒素(NG/NRGN)免费代测 
ARB11176 人单胺氧化酶A(MAOA)酶免分析 Human type a monoamine oxidase，mao-a,ELISA KIT
68990-09-0 BeefExtract 牛肉膏
BL1176 研磨杵(研磨棒)
精子活体检测试剂盒(低渗膨胀法)   10ml|20ml
1866-15-5 碘化硫代乙酰胆碱 Acetylthiocholineiodide
ARB14256 猪补体3(C3)elisa检测 
BTN60306 柱式血液DNAOUT Column Blood DNAOUT
RNase&DNase清除剂 Triton x-405
SJ0456 Potassium Chloride *化*(代"*")
ARB10108 人H-rAs ELISA检测服务 Human h-ras ELISA KIT
藻类RNA柱式提取试剂盒厂商关键词：藻类RNA柱式提取试剂盒,Algae RNA Column extraction kit,BTN120503

ARB10083 人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)尿液中含量检测 Human cx3c-chemokine receptor 1,cx3cr1 ELISA KIT
百里酚蓝-酚酞指示剂   100ml
辣椒素 Cyclo-C 2444-46-4
ARB13433 鸡可溶性E选择素(sE-selectIn)elisa检测 Chicken soluble e-selectin,se-selectin ELISA KIT
DL-4-羟基-3-甲氧基扁桃酸  L-Aspartic acid sodiu*(代"m") salt 55-10-7
T-fast感受态细胞 
ARB10236 人γ肽(Pγ)酶联免疫定量检测 Human Peptide γ,pγ ELISA KIT
L-甲硫*酸乙酯盐*(代"酸")盐 D-Histidine 2899-36-7
ARB11997 大鼠P物质(SP)Elisa分析 Rat substance p,sp ELISA KIT
BTN101219 即用型荧光定量RT-PCR试剂盒 Instant Realtime RT-PCR Kit
BL1102 40%丙*(代"烯")酰胺(19:1)
PY01-137  全胃浸粉  250克  
硫*(代"酸")阿布拉霉素 Myoglobin from equine skeletal muscle 65710-07-8
F020201 山羊抗小鼠IgG抗体 Goat Anti-Mouse IgG
ARB10045 人Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)elisa检测操作说明书 Human collagen type Ⅲ,col Ⅲ ELISA KIT
SJ0191 Dextran T-70  葡聚糖 T-70
尿素溶液(10mol/L)   100ml
藻类RNA柱式提取试剂盒厂商关键词：藻类RNA柱式提取试剂盒,Algae RNA Column extraction kit,BTN120503


·土霉素盐*(代"酸")盐溶液
编号：BTN120696
英文名称：Oxytetracycline HCl Solution
规格：10mL
本产品为溶于水:乙醇(2:1)混合液浓度为100mg/mL的土霉素盐*(代"酸")盐溶液，参考浓度为50mg/mL。土霉素烟酸盐(盐*(代"酸")土霉素；氧四环素盐*(代"酸")盐；地霉素；Oxytetracycline hydrochloride)，分子式：C22H24N2O9·HCl，分子量是：496.89，CAS号：2058-46-0，土霉素盐*(代"酸")盐能阻止*基酰-tRNA与30S亚单位结合，从而抑制蛋白合成。抗菌谱：革兰氏阴性和阳性细菌。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

·SP6体外转录试剂盒
编号：BTN91107
英文名称：SP6 in vitro Transcription Kit
规格：50次
本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有SP6启动子的模版DNA，以NTP为底物，从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 kb片段)	20μL(10 ng/μL)
SP6 RNA聚合酶混合液	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的DNA序列的上游必须有SP6启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将SP6启动子序列(5´ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3´)加上，转录其实是从3端G AGN G中的第一个G开始。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有SP6启动子的载体，并且克隆位点必须位于SP6启动子下游。三是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。四是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板	xμL	总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建议用50 ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本产品提供的阳性对照，建议用4μL)
SP6转录预配液(2×)	10μl	本成分还含其他促进剂，所以是混合物
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活SP6 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1. 没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2. RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3. RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有SP6 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4. RNA长度比预计的长。SP6 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5. 5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则SP6 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。
6. 如何得到带帽RNA？需加入带帽NTP类似物即可，本公司提供5种供选择。

我公司生产供应销*(代"售")的RNA纯化正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购藻类RNA柱式提取试剂盒厂商。