端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)北京厂家现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)北京厂家现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)北京厂家现货，产品信息：

类别：基因结构和功能

英文名：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit

产品名	产品编号	包装规格
端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)	BTN111009	50次

编号：BTN111009

规格：50次

英文名：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit

品牌：百奥莱博

本品是我司在经典TRAP技术基础上改良而得，专门用于快速测定人类细胞端粒酶的相对活性(需要跟对照样品比较)。端粒酶存在于85-90%的肿瘤组织中，因此通过检测端粒酶活性就能早期诊断大多数肿瘤。目前最常用的检测端粒酶活性的方法就是TRAP，它利用端粒酶能在外加的TS模板DNA的末端添加不同数量的TTAGGG序列这一特点，通过PCR检测延伸产物而高效检测端粒酶活性。原理如下：

 

产品特点：

1．一站式，提供从细胞裂解到PCR的所有试剂，但不含PAGE和银染试剂。

2．一管式操作，端粒酶延伸和PCR在同一体系中完成，方便快捷。

3．提供改良的、长为150bp的内参和含8个端粒序列的合成端粒，可有效排除PCR假阴性。内参长度远大于TRAP产物，不会干扰结果分析。

4．改良的TS模板和PCR引物，极大降低了引物二聚体的形成。

5．既可用于培养细胞，也可用于实体组织。

6．灵敏度高，最低可以检测到10个肿瘤细胞中的端粒酶活性。

 

试剂盒组成：

 

成分	规格
TRAP细胞裂解液	10mL
PCR Mix 3.0	1.5mL
合成端粒(PC)	50μL
TS-引物混合物(含内参)	300μL
超纯水	1mL
说明书	1份

 

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

 

使用方法：

 

一、端粒酶的提取

注意：端粒酶是蛋白质和RNA组成的复合体，RNA极容易被降解，因此，提取端粒酶应该跟提取RNA一样，尽量在低温条件下快速操作，并且必须使用RNase-free的耗材，桌面最好用固相RNase清除剂清洁(BTN3090)清洁。

1．对冷冻的实体组织：将50-100mg冷冻组织在液氮中用预冷的研磨器研磨成粉末，再转移到预冷的玻璃匀浆器中，加入200μl预冷的TRAP细胞裂解液，温和手动匀浆数次后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次，然后直接进入第3步操作。为保证裂解效果，可在显微镜下观察。如果组织样品不足50-100mg，可以按比例降低TRAP细胞裂解液的用量。

2．对新鲜的培养细胞和组织：用自备的预冷PBS洗涤105-106个经过胰酶处理的细胞或50-100mg新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清；加入200μL预冷的TRAP细胞裂解液悬浮细胞或组织。对细胞：涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。对组织：在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。如果细胞不足1×106或50-100mg，可按比例降低TRAP裂解液的用量。

3．12000-14000g 4℃离心20分钟。

4．收集160μL上清，先取部分用于测定蛋白质浓度，可通过测定215nm和225nm的光吸收得到，计算公式是蛋白质浓度(μg/μL)=0.144×(A215-A225)×稀释倍数，也可使用BCA法测定蛋白浓度。本试剂盒制备的细胞裂解物的蛋白浓度一般在10-750 ng/μL。知道各样品的蛋白浓度后，可用TRAP细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成一样便于比较，然后按10μL/管分装得到至少15管裂解物，放-80℃冷冻保存(可存放一年)。每个样品可取一管进行热灭活(95℃处理10分钟)后再放-80℃冷冻保存，此管将作为该样品的阴性对照。

 

二、TRAP反应

5．确定每个TRAP反应的细胞裂解物用量：为便于分析比较，每个TRAP反应所用的蛋白量(或细胞数)必须一样。由于细胞裂解物中一般都有高浓度的不明Taq DNA聚合酶抑制物(TRAP失败最常见的原因)，因此最佳结果往往是用稀释10-1000倍后的细胞裂解物得到。建议用一个样品稀释不同浓度做TRAP预实验。

6．在PCR管中按下表设置TRAP反应(50μL反应体系，以A和B两个样品为例)：

 

成份	A样品管	A阴性 对照管	B样品管	B阴性 对照管	实验 阴性对照	实验 阳性对照
A样品	2μl	-	-	-	-	-
A阴性对照	-	2μl	-	-	-	-
B样品	-	-	2μl	-	-	-
B阴性对照	-	-	-	2μl	-	-
TRAP细胞裂解液	-	-	-	-	2μl	-
合成端粒	-	-	-	-	-	2μl
TS引物混合物	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl
PCR Mix	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl
超纯水	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl

 注：为避免污染，最好等其他样品加完并盖上盖后再加合成端粒。

7．吹打混匀后进行PCR扩增，扩增条件(仅供参考，用户可优化)如下：

 

步骤	温度	时间
端粒酶延伸	30℃	30min
端粒酶灭活	95℃	5min
PCR(循环35次)	94℃	30s
	55℃	60s
	72℃	30s

 

三、PAGE-银染检测及结果解读(本试剂盒不含PAGE-银染检测试剂盒)

8．取5μL PCR反应液进行10%非变性PAGE电泳-银染显色实验(需另购本公司PAGE电泳套装和银染试剂盒)。如果背景高(主要是由反应体系中的蛋白成分引起)，可以先进行PCR产物纯化再进行PAGE电泳和银染。

9．跟预期结果(见下表)比较。如果结果跟下表不一致，则需要按具体情况分析原因。

 

现象	样品管结果	样品阴性 对照结果	实验阴性 对照结果	实验阳性 对照结果
典型TRAP条带 (条带数不限)	有则有端粒酶活性 无则无端粒酶活性	不出现	不出现	不出现
阳性对照的TRAP 条带(仅8条带)	不出现	不出现	不出现	出现
150bp内参	可出现可不出现	出现	出现	出现

 注：本试剂盒所用引物产生的典型TRAP条带最小条带为59bp。

 

疑难解答：

1．如果样品管有内参带，但没有TRAP条带，可能是端粒酶活性低或者失活。制备细胞裂解物时可在TRAP细胞裂解液中加入1/100体积的RNase抑制剂以抑制RNase活性，并在端粒延伸反应后增加DNA纯化一步，纯化后的DNA再用于PCR。此两步法TRAP需要用户自备DNA纯化试剂和dNTP。

2．如果样品对照管(端粒酶已经灭活)出现TRAP条带，可能是TRAP产物污染，需要使用洁净的PCR管和PCR试管架。样品制备、PCR设置和电泳需在不同房间进行。也可能是端粒酶没有彻底灭活，建议用RNase酶解法或酶解+热灭活法。

3．实验阴性对照管的实验结果中出现TRAP条带，可能是引物二聚体，可采取两步法TRAP，并且将DNA模板加入到70℃预热的PCR Mix3.0中再进行PCR。

4．实验结果不好时，可以直接采取2步法，先做端粒酶延伸和灭活，然后再纯化DNA，用纯化的DNA做PCR。此法需要用户自备dNTP。

端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)北京厂家现货专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit,端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒),BTN111009

我公司在保证产品质量的同时，以价格优、到货快、服务周到，致力于端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)的研发、销*(代"售")。售前、售中、售后免费技术指导，质量保证，可放心购买！

我公司的端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)北京厂家现货，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

编号	类别	名称
BTN70503Z	核酸电泳和回收	DNA marker(300-10000bp)
BTN160906	RNA纯化	植物RNA提取试剂盒(无酚无*仿柱式提取)
BTN131028	工具酶	嗜热菌蛋白酶
BTN130594	蛋白质研究	HRP标记内参抗体(β-Tubulin)
BTN121122	探针标记及检测	柱式探针纯化试剂盒
BTN131055	蛋白质研究	TCEP盐*(代"酸")膦
BTN90805	核酸扩增(PCR)	即用型PCR试剂盒(含染料)
BTN80904	RNA纯化	柱式真菌RNA大量提取试剂盒
BTN131029	工具酶	胰蛋白酶(质谱级)
BTN80103	RNA纯化	柱式细菌RNA提取试剂盒
BTN130531	蛋白质研究	组织培养专用蛋白酶抑制剂
BTN120680	克隆与表达	放线菌*(代"素")D
BTN130552	工具酶	碱性磷酸酶(偶联级)
BTN81208	蛋白质研究	印迹膜抗体稀释液
BTN130815	核酸扩增(PCR)	taq酶抗体
BTN130675	工具酶	核糖核酸酶HII
BTN120698	克隆与表达	青霉素G*盐溶液
BTN101123	蛋白质研究	PVDF膜(0.45μm，13×20cm)
BTN90602C	核酸电泳和回收	DNA marker(pUC19/MspI)
BTN130958A	核酸电泳和回收	红色DNA上样液(6×,非甘油)
BTN130628	工具酶	λ核酸外切酶
BTN80910	克隆与表达	X-gal溶液
BTN131008	蛋白质研究	弱RIPA裂解液
BTN120310	工具酶	T7 RNA聚合酶
BTN80909	克隆与表达	IPTG溶液
BTN100919	DNA纯化	消解酶干粉(溶细胞酶)(≥200U/mg)
BTN91204	蛋白质研究	动植物膜蛋白微量制备试剂盒

 

我公司生产供应销*(代"售")的基因结构和功能产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)北京厂家现货。