茜素红染色定量分析

茜素红染色定量分析
英文名：Alizarin Red S Staining Quantification Assay
茜素红染色定量分析说明：
      

Alizarin Red S (ARS), an anthraquinone dye, has been widely used to evaluate calcium deposits in cell culture. The ARS staining is quite versatile because the dye can be extracted from the stained monolayer of cells and readily assayed.

ScienCell’s ARS Staining Quantification Assay (ARed-Q) provides a sensitive tool for the recovery and semi-quantification of ARS in a stained monolayer of cells. Mineralization is assessed by extraction of calcified mineral at low pH, neutralization with ammonium hydroxide, and colorimetric detection at 405 nm in a 96-well format. This assay is more sensitive than the cetylpyridinium chloride (CPC) extraction method, improving the detection of weakly mineralizing monolayers [1]. It provides a wider linear range: destained ARS dye ranging from 30 µM to 4 mM shows a linear relationship with the absorbance at 405 nm, making dilutions of samples prior to measurement unnecessary.

间质干细胞成脂和成骨诱导分化
成骨和成脂诱导是鉴定干细胞的一种重要的方法，也是最常用、报道见得最多的方法。成骨最常用的染色方法是茜素红染色（碱性磷酸酶），成脂诱导最常用是Oil Red O （油红O）染色法。下面我介绍一下这两种染色方法的原理和步骤。 茜素红染色方法和原理：成骨诱导的过程是使钙离子能够以钙盐的方式沉淀下来，这就是我们常说的“钙结节”。鉴定钙结节的染色方法常用“茜素红”。
茜素红染色定量分析步骤：
（1）吸去诱导液，再PBS 洗一到两次；
（2）加入10％中性甲醛，固定30min-60min；
（3）吸去固定液，加入0.1%的茜素红染色液，染色6-10min；
（4）用PBS 洗两次，去处残留的染色液；
（5）加入PBS，完成染色；
干细胞老化的表现和处理
干细胞在培养过程中如果环境不适合其生长就会出现部分细胞的老化现象。这是干细胞培养的一个难点也是经常出现的问题。 干细胞老化表现： 细胞胞浆内特别是在核区附近出现黑色颗粒，表示细胞开始出现老化；细胞胞浆内出现空泡，则表明该细胞已老化或者已经开始分化（在全部细胞中出现少数老化细胞是正常的）；细胞立体感逐渐消失，细胞间的间隔不清，部分细胞扁平状，细胞的形状趋向多样； 贴壁性减退，出现一些漂浮的细胞；部分分泌强的细胞分泌物增多，细胞表面会比较脏；细胞增殖速度明显下降，分裂相的细胞明显减少。
茜素红染色定量分析老化的原因和预防： 接种密度的影响：部分干细胞具有一定的分泌性能，能够分泌一些对细胞有支持能力的因子类物质；所以必须维持一定的接种密度，否则会导致细胞增殖减慢，最后出现老化； 消化过度：消化细胞时会对细胞的表面蛋白有较强的损伤，所以消化的时间不能过长，使用合适浓度和pH 值的消化酶，否则会导致细胞老化和分化；
合适的密度的时候就要传代：细胞如果过密，接触抑制作用会导致细胞的活力减弱并影响增殖导致老化；
使用合适的血清和培养基：不同的干细胞对培养基特别是血清的要求不同，所以使用不同的培养用的血清进行筛选，寻找最适合该干细胞培养的血清是预防细胞老化，维持细胞正常生长的重要保证。