T4连接酶优惠

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")T4连接酶优惠，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：T4连接酶优惠
英文名：T4 DNA ligase
编号：RFT168
规格：100U
本T4 DNA Ligase是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。

产品组分：
T4 DNA ligase (5U/μl)————————100 U (20μl)
10×T4 DNA Ligation Buffer——————0.2 ml
50%PEG Solution————————————0.15 ml

活性定义：此酶的活力单位为Weiss Unit。1个Weiss Unit相当于约200个粘性末端连接单位(cohesive-end ligation unit, CEU)。1个CEU单位定义为在20μl的连接反应体系中，在16℃30分钟内，能使50%的经HindIII消化的λDNA片段连接所需的酶量。

注意事项：
1、T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。
2、PEG可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。

储存条件：-20℃。

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T4连接酶优惠关键词：RFT168,T4 DNA ligase,T4连接酶


·细菌基因组DNA提取试剂盒
编号：RFT037
英文名称：Bacterial genomic DNA Extraction Kit
规格：50次|100次
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取细菌(革兰氏阳性菌和阴性菌)的基因组DNA。溶菌酶能有效去除细菌细胞壁；蛋白酶K能把核酸解离出来； RNaseA能去除痕量的RNA污染；离心吸附柱能够高效、专一吸附DNA，最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次	100次	贮存方式
缓冲液GA	15 ml	30 ml	室温
缓冲液GB	15 ml	30 ml	室温
去蛋白液GD(浓缩液)	18 ml	36ml	室温
漂洗液GW(浓缩液)	25 ml	25 ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	15ml	室温
蛋白酶K(20mg/ml)	1 ml	2×1 ml	-20℃
溶菌酶(5mg/ml)	1ml	2×1 ml	-20℃
RNase A(10mg/ml)	1ml	1 ml	-20℃
吸附柱CG	50个	100个	室温
收集管(2 ml)	50个	100个	室温
说明书	1份	1份

准备工作：
1、准备55℃和70℃水浴；无水乙醇；1.5ml灭菌离心管。
2、按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液GW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3、每次使用前请检查缓冲液GA，缓冲液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、取细菌培养液1–2 ml，10,000 g离心1分钟，尽量吸净上清；向细菌沉淀中加入180μl EB，旋涡混匀后加入18μl 溶菌酶，室温放置10-15分钟，期间间歇混匀几次。
注：溶菌酶的用量和处理时间与处理的细菌种类密切相关，用户可以根据细菌种类进行调节。如革兰氏阳性菌应将处理时间延长到30-60分钟。
2、10000g离心1分钟，吸弃大部分上清，留下约10μl液体，彻底混匀。
注：由于余留的液体较少，彻底混匀菌体不太容易，用手指弹动管壁附加枪头反复吹打既能完全混匀菌体。混匀一定要彻底，否则容易导致步骤8中离心柱堵塞。
3、向菌体沉淀中加入200μl缓冲液GA，混匀。
4、向管中加入20μl 蛋白酶K，混匀，55℃处理15-30分钟，期间间歇混匀2-3次至溶液清亮。
注：加入蛋白酶K后会产生絮状物，消化彻底的标志是絮状物完全消失，溶液变清亮。如消化不彻底，会导致步骤8中离心柱堵塞。
5、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液，混匀后室温放置2分钟。
6、加入220μl缓冲液GB，混匀，70℃放置10-30分钟(对于革兰氏阳性菌，时间应延长到60分钟)。
注：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置相应时间后溶液会变清亮。如溶液未变清亮，应延长70℃处理时间。如果絮状物不能处理干净，容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
7、加入220μl无水乙醇，充分混匀。
注：加入乙醇后会产生絮状沉淀，可用枪头反复抽打1-2次将沉淀弄碎后再上柱。如果絮状物未做处理，容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
8、将上一步所得溶液和絮状沉淀加入到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，11000g离心5分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
注：如果出现吸附柱堵塞现象，可将离心时间延长到10分钟。
9、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11,000 g离心2分钟，倒掉废液，吸附柱放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入700μl漂洗液GW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11,000 g离心60秒，倒掉废液，吸附柱放入收集管中。
11、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液GW，11,000 g离心60秒，倒掉废液。
12、吸附柱CG放回收集管中，11,000 g离心2分钟。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
13、将吸附柱CG转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，11,000 g离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于50μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
14、DNA产物-20℃保存。

DNA浓度及纯度检测：
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。

储存条件：室温，有效期12个月。


T4连接酶优惠关键词：RFT168,T4 DNA ligase,T4连接酶


·2.5mM dNTP溶液
编号：RFT163
英文名称：dNTP Mixture(2.5mM)
规格：0.5ml|5×0.5ml
本品为dATP、dGTP、dCTP、dTTP的等摩尔(2.5mM)混合物。dNTP纯度均达到99％以上，不含DNase和RNase，适合多种聚合酶的扩增反应。在PCR反应中，2.5mM dNTP 是50μl反应体系用4μl(终浓度为各200μM)。

储存条件：-20℃。

·蛋白酶抑制剂混合物(植物蛋白提取用)
编号：RFT198
英文名称：Protease inhibitor cocktail for plant cell and tissue extracts
规格：1ml|5×1ml
本品是一种用于植物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物(200mM AEBSF，10mM Bestatin，3mM E-64，2mM Leupeptin，2mM Pepstatin A，500mM Phenanthroline in DMSO)。一个包装的本产品通常足够用于100ml裂解液的配制。

植物细胞或组织提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。

本产品为经优化和测试的用于植物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝*酸、半胱*酸和酸性蛋白酶抑制剂、以及*基肽酶抑制剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例把蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100×)加入裂解液中，即可用于常规的组织蛋白的提取，并有效抑制蛋白降解。

本产品可以有效抑制常规细胞或组织提取物中的各种蛋白酶活性，如丝*酸蛋白酶、*基肽酶、半胱*酸蛋白酶、苏*酸和天冬*酸蛋白酶、金属蛋白酶等。其中AEBSF是一种水溶性的丝*酸蛋白酶不可逆抑制剂，其抑制常数与PMSF和DFP的抑制常数相似，可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶，作为PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。Aprotinin是丝*酸蛋白酶的竞争性可逆抑制剂；Bestatin是*基肽酶可逆抑制剂；E64是半胱*酸蛋白酶不可逆抑制剂；Leupeptin是丝*酸和半胱*酸蛋白酶可逆抑制剂；Phenanthroline是金属蛋白酶的可逆抑制剂。

使用方法：

1、本蛋白酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)，混匀后即可使用。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。
2、待所需的抑制剂添加完毕混匀后，就可以开始进行常规植物组织的裂解和蛋白提取。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

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