北京现货超敏ECL化学发光即用型底物2.0库存

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北京现货超敏ECL化学发光即用型底物2.0库存由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多超敏ECL化学发光即用型底物2.0等免疫检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京现货超敏ECL化学发光即用型底物2.0库存
产地：国产|进口
编号：ZN1942
规格：25ml×2/50ml×2
品牌：百奥莱博
产品保存：4℃避光保存，一年有效。
产品规格：
50ml 工作液(可用于 500cm2的膜)
溶液 A 25ml
溶液 B 25ml
产品说明：超敏 ECL 化学发光试剂盒，是一款具有超高灵敏度的化学发光(ECL)底物，可与二抗上耦连的辣根过氧化物酶发生化学反应，发出荧光，从而可以通过用X光片压片或 CCD成像仪检测样品,当底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时，可检测到常规 ECL 底物无法检测的低丰度靶蛋白。
产品特点：
1.用于辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物
2.使用适当的一抗和二抗，可在 NC 膜或 PVDF 膜上检测丰度为低皮克到中等飞克的蛋白条带
3.所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级
4.通过胶片或成像系统进行曝光，易于捕获图像
5.试剂盒组分能够在 4℃条件下稳定放置一年
6.配方经过优化，可适用于浓度极低的抗体检测重要产品信息：好的免疫印迹结果需要优化实验条件，包括样品量，凝胶类型，转移方法，膜类型，封闭剂，洗涤缓冲液，一抗浓度，二抗浓度和孵育时间等。
1.为获得最佳效果，在孵育步骤中使用摇床。
2.不要使用叠氮化*作为缓冲液的防腐剂，它会抑制 HRP的活性。
3.始终戴上手套或使用干净的塑料镊子，金属装置必须没有可见的生锈痕迹，这写都可能导致斑点或高背景。
4.工作液暴露在阳光下或任何其他强光下都可能损害工作液使用效果。
5.由于封闭剂与抗体的交叉反应引起非特异性信号，所以实验测试对于确定每种蛋白质印迹系统的适当封闭剂是至关重要的。
6.当使用抗生物素蛋白/生物素系统时，避免使用牛奶作为封闭剂，牛奶中含有不同量的内源性生物素，导致高背景信号。
7.使用足够量的洗涤缓冲液，封闭缓冲液，抗体溶液和底物工作溶液来覆盖印迹膜并确保其不变干。使用大体积的封闭和洗涤缓冲液可以使非特异性信号最小化。
8.将 Tween-20洗涤剂(终浓度为0.05-0.1%)加入到封闭缓冲液和所有稀释的抗体溶液中，以减少非特异性信号。
注意事项：
1.A 液和 B 液吸取过程中必须更换移液器枪头，避免相互污染失效。
2.A 液和 B 液混合为工作液后，需避免强氧化剂如次*酸*等对工作液的影响。
3.须确保试剂瓶干净，无微生物或其它试剂污染。
4.为了您的安全，请穿实验服并佩戴一次性手套。
需要材料：
NC 膜或 PVDF 膜
X 射线胶片或成像系统
摇床
洗涤缓冲液：含有 0.05-0.1%吐温 20的洗涤液，PBS：10mM 磷酸*，150mM NaCl，pH7.2 TBS：10mM Tris，150mM NaCl，pH7.4
特异性的一抗，用洗涤缓冲液或封闭缓冲液稀释
HRP标记的二抗，特异性针对一抗，用洗涤缓冲液或封闭缓冲液稀释
封闭液：洗涤缓冲液中 1-5%(w/ v)封闭剂(例如酪蛋白，BSA 或脱脂奶粉)
注意：我们的ECL底物与所有封闭缓冲液兼容
使用说明：
1.室温封闭膜 60分钟，同时摇动。
2.去除封闭液并添加一抗，在室温振荡孵育1 小时或在 2-8℃振荡过夜。
3.将膜悬浮于清洗缓冲液中摇动 5分钟以上，更换洗涤缓冲液至少 4-6次。增加洗涤缓冲液体积，洗涤次数和洗涤时间可能有助于背景信号最小化。
4.在室温下孵育二抗 1 小时，同时摇动。
5.重复步骤 3，去除未结合的HRP 结合物。
注意：与 HRP 结合物孵育后，膜必须彻底清洗。
6.通过混合等量的检测试剂 A和 B 来制备底物工作溶液。每平方厘米膜使用 0.1mL 工作溶液。
7.在室温下用工作液孵育印迹膜 1-2分钟。
8.将印迹膜放在透明的保鲜膜或保护膜中。使用吸收性的纸巾去除多余的液体，小心地将气泡压出。
9.将印迹膜放在×光胶片或成像系统上显色。底物孵育后的30分钟内，发光最强烈。

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·Gastrin mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN0566
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Gastrin mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Gastrin的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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