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蛋白双向电泳技术
蛋白双向电泳技术服务
简介：随着后基因组时代的到来，蛋白质组学得到了空前的发展，蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能。包括蛋白质组、蛋白质组学、功能蛋白质组学和结构基因组学等新的概念的提出，蛋白质组学已成为当今生物领域中极其活跃的学科。（Two Dimensional Electrophoresis ，2DE) 是蛋白质组研究的三大关键核心技术之一。双向电泳由于具有高分辨率和高灵敏度已成为分析复杂蛋白混合物的基本工具。
原理：2DE 的第一向电泳是等电聚焦电泳(Iso-Electric Focusing ，IEF) ，然后通过SDS-PAGE)凝胶电泳对蛋白质进行第二向电泳；在IEF 中，蛋白质因等电点不同而被分离，在SDS-PAGE 中，不同分子量的蛋白质相互间被分离开，再用考马斯亮兰或银染进行检测，经Pdquest 等软件对结果进行比对、解析。
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文献和实验【目的和要求】 1、 学习和掌握蛋白质双向电泳的基本原理和方法。 2、 了解双向电泳技术在蛋白质组学研究中的应用。 【实验原理】 蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦（Isoelectrofocusing,IEF）,根据蛋白质的等电点不同进行分离；第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后，可以得到蛋白质分子
-TOF）得到相应的肽质指纹图谱，然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质。结果 获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱，三块胶的平均蛋白质匹配率达76%，蛋白质点在位置上有较好的重复性，不同胶间的蛋白质点在等电聚焦IEF方向偏差是（0.98±0.26）mm，SDS-PAGE方向偏差是（1.23±0.22）mm，并且得到了若干与细胞增生、分化、周期调控信号转导或肿瘤发生有关的蛋白质，例如SFN，热休克蛋白-27等。结论 为进一步探讨癌变机理及筛选其特异性分子标志物打下方法学基础。 《双向电泳技在筛选
其实研究王晓东的科研思路，发现这个规律是相当明显的，他自己也曾在讲课时提到科研 的三板斧，其中的两板斧肯定是：建立体外生化检测系统，用这个系统跟踪蛋白纯化过程 。他的过人之处就在于他的实验室能用 100升的细胞，过5，6个column最终纯化得到单一 的生化组分。这个毅力有点像那个从几十万个猪脑提取某个激素的故事，他的实验比提激 素可能要简单，但是他提取的不是一个，而可能是几个，这几个将细胞调亡线粒体途径阐 述得相当干净明了（干净的意思是他用体内尤其是体外重建实验证明的，不像某些文章
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