基因突变技术服务（威斯腾生物-中关村生物医学研发检测共享平台

基因克隆(gene cloning)

 

基因克隆是70年代 发展起来的一项具有革命性的研究技术，可概括为∶分、切、连、转、选。"分"是指分离制备合格的待操作的DNA，包括作为运载体的DNA和欲克隆的目的DNA；"切"是指用序列特异的限制性内切酶切开载体DNA，或者切出目的基因；"连"是指用DNA连接酶将目的DNA同载体DNA连接起来，形成重组的DNA分子；"转"是指通过特殊的方法将重组的DNA分子送入宿主细胞中进行复制和扩增；"选"则是从宿主群体中挑选出携带有重组DNA分子的个体。基因工程技术的两个最基本的特点是分子水平上的操作和细胞水平上的表达，而分子水平上的操作即是体外重组的过程，实际上是利用工具酶对DNA分子进行"外科手术"。一般来说，基因克隆技术包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构建成新的重组DNA，然后送入受体生物中去表达，从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。因此基因克隆技术又称为分子克隆、基因的无性繁殖、基因操作、重组DNA技术以及基因工程等。

基因定点突变：

基因突变是指由于DNA碱基对的置换、增添或缺失而引起的基因结构的变化，亦称点突变。在自然条件下发生的突变叫自发突变，由人工利用物理因素或化学药剂诱发的突变叫诱发突变。基因突变是生物变异的主要原因，是生物进化的主要因素。在生产上人工诱变是产生生物新品种的重要方法。根据基因结构的改变方式，基因突变可分为碱基置换突变和移码突变两种类型。

 

服务要求：

1、请您通过EMAIL提供需要进行突变基因和克隆基因的全部详细序列；

突变前序列请标注为：wild sequence

突变后序列请标注为：mut sequence

2、请提供突变和克隆基因的详细背景资料；

如：突变前的测序结果，使用何种限制酶切位点，克隆于何种载体。

3、说明实验的具体要求。

4、签定必要的技术保密合同。

操作程序：

1、我们将首先对测序结果进行分析，然后设计突变方案。

2、根据突变方案设计合成突变引物，进行基因突变实验的PCR反应，克隆变异体。

3、进行DNA测序验证突变序列的正确性。

4、提供实验结果，包括实验操作规程，突变用引物，质料变异体以及含有该质料的菌种，测序结果等。

完成时间：

接到样本1月以内。

（威斯腾生物--原代培养、细胞敲除、模式动物一站式科研服务！）


实验服务流程

威斯腾生物服务项目

分子生物学类	蛋白质与免疫学	动物实验
实时荧光定量PCR	单克隆抗体制备	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗体制备	抑郁症动物模型
ELISA（酶联免疫吸附法）技术	Western-blot 实验服务	脊髓损伤模型
生化指标检测	蛋白双向电泳实验服务	脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测	原核蛋白表达纯化	骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表达纯化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白质组学	心力衰竭模型
	SLAC蛋白组学	肺动脉高血压动物模型
		高血压模型
病毒类	实验课题整体外包	粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化	整体课题外包	大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化	细胞整体实验外包	慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化	动物整体实验外包	过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代细胞培养	肝纤维化模型
细胞因子芯片	骨髓间充质干细胞培养	胆结石模型
生长因子芯片	脂肪干细胞培养	急性胰腺炎模型
信号通路磷酸化水平检测芯片	心肌成纤维细胞培养	急性肾衰竭模型
BioPlex悬浮芯片	软骨细胞培养	体内血栓模型
生长因子芯片	血管内皮细胞培养	关节炎模型
炎症因子芯片	神经元细胞培养	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	内皮组细胞原代培养	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因编辑动物
趋化因子芯片	电生理相关服务	动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片	膜片钳实验
细胞生物学	高通量测序	代谢组学
细胞原代培养	mRNA测序	气相色谱GC/MS
MTT检测	LncRNA测序	液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测	全基因组测序	核磁共震NMR
细胞周期检测	RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验	外显子测序	影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭	16s扩增子测序	Micro-CT
流式分选	Small RNA测序	小动物活体成像
CCK8/XTT检测	宏基因组测序	核磁共振
台盼蓝检测细胞活性	单细胞测序	PET-CT
药物筛选细胞学实验	circleRNA测序
细胞粘附性检测	甲基化测序	基因编辑动物
细胞划痕实验		条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验		全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理类	CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入	基因芯片
扫描电镜	基因定点突变细胞系	LncRNA芯片
透射电镜	单基因敲除细胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除细胞系	mRNA芯片
免疫组化	目的基因敲入细胞系	甲基化芯片（限人和小鼠来源样本）
Tunel（原位末端凋亡法）检测	报告基因敲入细胞系	SNP芯片（限人和小鼠来源样本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色	CRISPR/Cas9动物敲除/敲入	科研方案设计与SCI相关服务
原位杂交	基因敲除大鼠/小鼠	科研文献论著翻译
荧光原位杂交	基因敲入大鼠/小鼠	SCI论文翻译润色服务
特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等）		临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测	药物筛选服务项目	药效学评价
水迷宫实验	高通量自动药物筛选平台	神经系统药物药效学评价
旷场实验	细胞高内涵药物筛选平台	抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测	蛋白质组学靶标研发平台	心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测	分子药理研究平台	泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳	生物膜片钳药物筛选平台	内分泌系统药物药效学评价
	常规药物体外筛选	抗炎免疫药物药效学评价

【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！