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文献和实验我先说我有的质粒和菌株：PPIC9K，PPIC9，PPICZahphaA，B，C 以及一个改造的PPIC9K载体，EcoRI和BamHI双酶切，C末端引入了一个6histag 菌株：GS115，KM71，X33，以及十几个空载体对照菌株 我的酵母表达Protocol： >10ug质粒用Sal线性化，加1/10体积的3M NaAC PH5.2和3倍体积的乙醇沉淀 70％乙醇洗一遍，20ul ddH2O重溶 按照公司手册做电转化感受态，一般OD
型石油酵母Y11430突变 而来，常用的3株宿主菌是GS115，KM71 和 MC1o0-3。GS115和KM71是Y1 1430的组氨醇脱氢酶基因(histidinol dehydrogenase gene，h/s4)缺失突变体，不能合成 H/s4，因此质粒载体需携带h/s4，转染后的阳性重组子可以用h/s4缺陷 (h/s4-)平板进行筛选，但是GS115和KM71存在一定的低频率自发回变，即重新变为h/s正常菌株，致使h/s4’平板筛选阳性重组子存在假阳性情况。GS115的启动子为P，在含甲
的酿酒酵母的分泌信号—α交配因子(α-factor)引导序列已经成功地引导了几种外源蛋白的分泌。分泌表达载体主要有：pPIC9，pPIC9K，pHIL-S1，pPICZα A，pYAM75P等。胞内表达载体主要有：pHIL-D2，pA0815，pPIC3K，pPICZ，pHWO10，pGAPZ， pGAPZa(Invitrogen)，pPIC3.5K等。工程菌株Y11430，MG1003，GS115 (AOX1)，KM71，SMD1168。毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种，都具有
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