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文献和实验-1,pBADHis, pBADHislacZ,pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒:pCDFduet-1 以及pCDNA3.1,pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta(DE3),Rasettagame(DE3),Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒: pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
integration into ribosomal DNin yeast)质粒,旨在将目的基因靶向整合到rDNA簇上(rDNA簇为酵母基因组中串联存在的150个重复序列),因此利用pMIRY2质粒可以得到100个以上的拷贝。值得注意的是,酿酒酵母表达的外源蛋白质往往被高度糖基化,糖链上可以带有40个以上的甘露糖残基,糖蛋白的核心寡聚糖链含有末端仅1,3甘露糖,产物的抗原性明显增强。所以,酿酒酵母常常用来制备亚单位疫苗(如HBV疫苗、口蹄疫疫苗等)。(2)甲醇营养型酵母表达系统 甲醇营养型酵母包括汉森酵母
近年来,Invitrogon公司开发了毕赤酵母表达系统的系列产品,短短几年已经有300多种外源蛋自在该系统得到有效表达,被认为是目前最有效的酵母表达系统。 毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种,都具有HIS4营养缺陷标记。其中,GS115茵株具有AOX1基因,是Mut+,即甲醇利用正常型;而KM71菌株的AOX1位点彼ARG4基因插入,表型为Muts,即甲醇利用缓慢型,两种菌株都适用于一般的酵母转化方法。 Pichia.pastoris 酵母菌体内无天然质粒,所以表达载体需
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