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3个月
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MiaoLingBio
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1000
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淼灵生物
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1管
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文献和实验DNA Oligo（引物）；3. 构建表达 sgRNA 的质粒 ；4. sgRNA 活性检测；5. 利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系 。本实验室老师也想跟跟潮流，弄个敲除细胞系出来，于是本小硕就被打发过来进行 CRISPR/Cas9 技术的学习，刚开始是一头雾水，后来在咨询有过分子生物学基础的博士师姐及科室其他老师后，终于是摸到一点门道了。我们都知道 gRNA 的设计对于 CRISPR/Cas9 基因敲除至关重要，而 gRNA 设计的关键是寻找正确的 CDS 序列。所以在这里
dsRNA 进入细胞后产生的小分子干扰RNA（siRNA）的反义链和多种核酸酶形成了沉默复合物(RISC)，RISC具有结合和切割mRNA的作用而介导RNA干扰的过程。RNAi作用机制注：进行基因干扰前，首先需要对目的细胞进行本底表达检测，本底表达高，可以进行干扰操作，如果本底表达较低，则考虑换同种其它细胞或进行基因过表达操作。 基因敲除：CRISPR/Cas9是一种能够对基因组的特定位点进行精确编辑的技术，其原理是核酸内切酶Cas9蛋白通过导向性RNA（gRNA）识别特定基因组位点并对双链DNA进行
Nat Methods：陈玲玲/杨力/李劲松等开发新技术，实现环状 RNA 功能性筛选和研究
Methods 官网）前述实验结果表明 RfxCas13d 是一种高效、特异的 circRNA 敲除工具。研究团队构建了靶向 9 个人类细胞系中 2908 个高表达 circRNA 的 BSJ-gRNAs 文库，尝试使用该工具鉴定潜在的参与细胞增殖的候选 circRNA。 BSJ-gRNA 文库构建（图源：Nature Methods 官网） 研究团队将 BSJ-gRNA-RfxCas13d-HT29 细胞转移到裸鼠体内进行体内功能缺失（loss-of-function，LOF）表型筛筛选，注射 22 天后
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