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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
3个月
- 英文名:
MiaoLingBio
- 库存:
1000
- 供应商:
淼灵生物
- 规格:
1管
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文献和实验共沉淀最大的优势在于该体系是在生理条件下检测蛋白质之间的相互作用,因此,不仅可以检测到体内形成的天然复合体,而且可排除过表达靶蛋白所带来的假阳性。其次内源性的靶蛋白质是完全加工、修饰和成熟的蛋白质,因此,依赖于修饰的蛋白质相互作用也能被检测到。 二、实验步骤: 1. 构建表达质粒 2. 共转细胞 3. 收集并裂解细胞 4. 加入蛋白A/G和抗体共同孵育 5. Westernblot检测
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为非溶性蛋白,也可被单克隆抗体柱层析,重新还原的产物可以被抗Derpl血清识别,其结合率优于pGEX克隆产物。为了减少繁琐,表达更好的重组蛋白,有人尝试以Der p1的原酶和酶原放人同一酵母载体表达,效果良好。 3.哺乳动物表达 构建一个扩大的载体PEE6.HCMV.GS,从中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达Derpl和Derp2。人巨细胞病毒(CMV)启动子(ACMD)和谷胱甘肽合成酶基因,通过放大质粒拷贝数增加细胞内酶高效表达,以控制抗代谢产物硫代
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