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3个月
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MiaoLingBio
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1000
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淼灵生物
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1管
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文献和实验1 、目的基因的获取： （ 1 ）特定细胞表达的目的基因：提取 RNA 后进行反转录， PCR 扩增； （ 2 ）载体中含有的目的基因：酶切或 PCR 获取； （ 3 ）融合蛋白基因：根据需求，进行 PCR 合成目的基因； 2 、穿梭质粒的构建： （ 1 ）携带目的基因的穿梭质粒的构建：通过酶切、连接的方式得到，一般采用的是 pShuttle-cmv 载体； （ 2 ）携带多个目的基因的穿梭质粒的构建：如同时表达两个目的
1. 细胞内同源重组 这种方法需要在两个DNA分子之间进行重组，第一个DNA分子(即所谓穿梭载体，shuttle vector)含有腺病毒左侧的反向末端重复序列（LITR）、腺病毒包装信号（ψ）等顺式作用元件以及目的基因表达盒和腺病毒基因组的左端一段序列；另一个DNA分子（即骨架载体，backbone vector）与第一个DNA分子的3′端略微重叠，然后继续向右，包含有大部分的病毒基因组序列
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