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MiaoLingBio
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1管
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文献和实验在哺乳动物细胞中进行RNA干扰:设计，实验和分析siRNA效应
而介导基因沉默。 实验范例 实验说明： 选择哺乳动物细胞中的3个基因：GAPDH, c-myc, 和一个RNA结合蛋白基因La作为研究的目标靶。相应的mRNAs序列进行分析来确定siRNA设计方案，进行siRNA制备，选择合适方法检测基因抑制的效果。根据基因的不同区域，每个基因分别设计4组不同的siRNAs。分别转染Hela细胞并检测目标靶基因表达抑制的程度。siRNA介导的基因表达抑制的程度分别通过mRNA和蛋白表达水平来检测。 超过一半以上的siRNAs对目的基因的抑制
2)、哺乳动物/真核表达载体 pcDNA3.1+ 不含任何标签的真核表达载体 amp/neo 5.4kb E. coli/mammals pcDNA3.1- 不含任何标签的真核表达载体 amp/neo 5.4kb E. coli/mammals pcDNA4/V5-His A, amp 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA 3.1(-) myc-hisA 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA 3.1(-) myc-hisB 含His标签
小分子干扰RNA (Small interfering RNA ，siRNA ) 是一种非常有效的工具，能够在包括哺乳动物细胞在内的多个体系中抑制特定基因的表达，从而研究某个基因的功能或者是相关信息。但是这种强有力的方法的难题之一是需要设计，合成siRNA s 和验证其效果，从而找到最有效的siRNA s 。这个过程需要花费相当的时间和经费。以化学法合成基因特异的siRNA s 为例，由于设计好的siRNA s 中通常只有大约25% 的siRNA s 能高效抑制基因的表达（抑制效率>80
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