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3个月
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MiaoLingBio
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1000
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淼灵生物
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1管
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文献和实验蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。 mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系： mRFP-GFP-LC3 融合蛋白的病毒产品 mRFP 用于标记及追踪 LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体。由于 GFP 荧光蛋白对酸性敏感(pH 敏感)，当自噬体与溶酶体融合后 GFP 荧光发生淬灭,而 mRFP 相对稳定，因此只能检测到红色荧光。 1. 哺乳动物 LC3 表达质粒
Nature：浙大陈才勇团队首次发现细胞内血红素分子伴侣 HRG-9 和 TANGO2
血红素的外排。这些结果表明，秀丽线虫 HRG-9 和 HRG-10 负责将血红素转运出贮存部位以供给细胞利用。 研究人员发现，哺乳动物等具有血红素合成能力的生物也有一个 hrg-9 的同源基因——TANGO2（transport and Golgi organization），它最初被认为参与调控蛋白质运输和高尔基体结构【4】。为了确定 TANGO2 是否也调控血红素稳态，研究人员利用多个血红素感应体系，对酵母、斑马鱼以及哺乳动物的 TANGO2 基因进行了研究。遗传学实验结果显示，表达酵母
"把基因表达量调高"听起来是个简单需求，但用 CRISPRa 和用 cDNA 过表达质粒，得到的细胞模型和结论都可能完全不同。选错的话，表型实验从一开始就偏了。 先说结论：过表达质粒是在细胞质里额外生产一份蛋白，表达量远高于生理水平、不考虑 isoform 和调控背景、也无法保证定位正确；CRISPRa 是在内源基因组位点上激活转录，产物是天然的剪接 isoform、受内源调控元件约束、表达量更接近生理范围。想问"这个基因多了会怎样"用过表达，想问"把这个基因的内源表达调高
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