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MiaoLingBio
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文献和实验核酸疫苗载体及表达调控元件 基因免疫 载体常用真核细胞表达质粒，如能在哺乳动物细胞中高效表达真核启动子的质粒，包括长末端重复序列(LTR)、猴空泡病毒(SV40)及巨细胞病毒(CMV)等启动子等。基因免疫载体由3个部分组成：①目的蛋白基因编码序列；②细菌质粒骨架元件，包括复制起点、多克隆位点和选择标记；③转录表达调控元件，包括真核启动子／增强子、转录终止／多聚腺苷酸化信号序列。表达抗原蛋白能力的强弱，取决于其启动子的强弱。目前携带CMV启动子的真核表达质粒
子和多聚核苷酸信号等。 将外源基因导入哺乳动物细胞主要通过2类方法 ：一是感染性病毒颗粒感染宿主细胞，二是通过脂质体法、显微注射法 、磷酸钙共沉淀法及DEAE一葡聚糖法等非病毒载体的方式将基因导入到细胞中。外源基因的体外表达一般采用质粒表达载体，如将重组质粒导入CHO细胞可建立高效稳定的表达系统，而利用COS细胞可建立瞬时表达系统。目前，病毒载体已成为动物体内表达外源基因的有力工具，在临床基因治疗的探索中也发挥了重要作用。痘苗病毒由于其基因的分子量相当大(约187kb)，利用它作为载体可同
目的基因的细胞株。 插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。注意在此载体 中有二个EcoR1位点存在。 2. pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体 (Enhanced Fluorecent Protein Vector) 特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40早期
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