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其基本原理是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细胞或组织样本中的蛋白,转移到固相载体(如PVDF膜或者NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且可以保持其分离的多肽类型及生物学活性不变。蛋白质或多肽作为抗原,与相应的抗体起免疫结合,再与辣根过氧化酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)或同位素标记的二抗起反应,经过底物显色以检测电泳分离的特异性目的蛋白表达情况。该法结合了凝胶电泳和固相免疫测定两种技术的高特异性和高敏感性,可以对目标蛋白进行定性和半定量的分析。
拓普生物是为生命科学研究提供一站式专业服务的公司,其成立即建立健全的WB平台,有多个跑胶系统和转膜系统,其中转膜系统包括湿转和半干转,可以同时进行多样本和多蛋白检测;另外还具备了专业的技术人员和实验监控人员,可以对实验结果进行严格的把关。
如下是我们公司的WB平台的仪器设备
WB实验流程:

结果展示:

WB灰度分析的统计结果
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文献和实验最近师妹开始做 WB 实验了,但是一天又一天重复做,却次次结果不理想。除了没有拿到组会可以汇报的条带外,师妹集齐了所有奇奇怪怪的条带:微笑带,皱眉带,拖尾带,甚至没有条带…… 师妹也因此对我发出了灵魂拷问:「为什么 WB 实验这么容易翻车?」 虽然 WB 是一类基础实验,但是基础并不代表简单。翻车的主要原因在于 WB 的步骤实在繁琐:从配置蛋白胶开始,到蛋白电泳、蛋白转膜、抗体孵育,一整套流程下来花费 1~2 天的时间才能进行最后的显影。这些环节中但凡有一个出错,就会导致实验
「救命!做 WB 蛋白样品提取时,样品加入裂解液,离心后发现管里有很多的胶状物,非常粘稠,有点像鼻涕!多加裂解液稀释一下仍然没有效果,蛋白浓度还变得很低。不死心的我把它戳出来玩了一会,戳戳戳仍然是一大团,这粘稠物是什么?对我的后续实验会有什么影响?」 当你看到这团粘稠的「鼻涕」,就意味着你即将经历下面五个难题的考验: 1. 样品吸液困难 堵塞移液器:离心后吸上清液的时候胶状物会堵塞移液器头,移液后上清液所剩无几。 无法分离上清液:样品太
songling8205 本人正在做蛋白检测,想知道冻存在-80度冰箱里的标本,在进行蛋白提取前用什么方法解冻,有利于减少蛋白丢失,尽可能减少对实验的影响,谢谢相关人士指导!! 急求!!!! fangweibin119 把样品放在冰上 songling8205 我通常是放在4度冰箱让它缓慢融化的,可是这样造成分离的单个核细胞呈团块状沉积于1.5ML的EP管中
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