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免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)只要以抗体和抗原之间的特异免疫反应为基础,研究蛋白质与蛋白质间相互作用的经典方法。其基本原理是在细胞裂解液中加入抗原特异性的抗体,抗体、抗原、以及与抗原具有相互作用的蛋白质通过抗原与抗体之间免疫沉淀反应将形成免疫复合物,经过纯化,洗脱,收集免疫复合物,SDS-PAGE电泳,western blot和(或)质谱可鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。
二、服务内容
1、蛋白质抽提与定量;
2、免疫共沉淀(以normal IgG作为对照);
3、SDS-PAGE分离,western blot 和(或)质谱鉴定相互作用蛋白质;
4、实验报告提交。
三、顾客提供
1、蛋白质样品(组织、细胞、蛋白质溶液等)、用于免疫共沉淀的一抗及目的蛋白的相关信息;
2、需要通过转染载体表达基因的,提供表达载体,没有载体的我公司可以载体构建服务。
3、其他与免疫共沉淀相关信息。
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文献和实验了一线技术支持常被问到的问题,希望这篇纯干货能帮助大家顺利升级打怪,早日驾驭 IP、co-IP。 IP、co-IP、pull-down 简介 IP(Immunoprecipitation),免疫沉淀:是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等基质上的特异性抗体对抗原进行小型亲和纯化的一种方法 Co-IP(co-Immunoprecipitation),免疫共沉淀: co-IP 是一种常用的鉴定蛋白-蛋白相互作用的方法,其基本实验流程和IP类似,通过使用诱饵蛋白(IP 中的抗原,bait protein)特异
—— co-IP 检测 Hsp90 与 Cdc37 结合情况1、实验材料SKBR3 细胞,PMSF(Amresco,cat:329-98-6),cocktail(上海晶莱生物),脱脂奶粉(cat:66196131T),β-actin(上海晶莱生物)。Anti-Hsp90(santa,cat:sc-69703)、Anti-Cdc37(santa,cat:sc-13129)、Protein A+G agrose(Beyotime),细胞刮,4 度离心机(eppendorf,centrifuge
一、原理: 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法,基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵,将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育,促进免疫复合物的形成;随后加入能够与抗体Fc段结合的proreinA/G(预先结合固化在琼脂糖小珠上),形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物,纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白,应用Westernblot或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。 与其它研究方法相比,免疫共沉淀
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