2×SYBR qPCR MasterMix北京厂家现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应2×SYBR qPCR MasterMix北京厂家现货，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：2×SYBR qPCR MasterMix北京厂家现货
规格：1ml|5×1ml|20×1ml
产地：国产|进口
编号：RFT094
本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。已经将 Hot-Start DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液和 SYBR? Green I 等试剂预混成一种适合 Real Time PCR反应检测用 2×MasterMix试剂，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板、引物和水，便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对目的基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。以50μl qPCR反应体系为例，每次使用25μl 2×MasterMix，1ml可做40次 50μl qPCR反应。

使用方法：
1、冰浴中彻底融化2×qMasterMix，彻底混匀后快甩离心将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

 

	50μl反应体系	20μl反应体系	终浓度
2×qPCR MasterMix	25μl	10μl	1×
上游引物 10μM	1μl	0.4μl	0.2μM
下游引物 10μM	1μl	0.4μl	0.2μM
ROX Slolution I or II(50×)	1μl or 不加	0.4μl or 不加	x
模板	×μl	xμl	10pg-100ng
水	补至50μl	补至20μl

3、快甩离心将反应液收集到管底。
4、检测片段大于300bp，qPCR仪上推荐执行以下程序(三步法)：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	95℃	10min*	1
变性	95℃	15sec	40
退火	55℃	30sec
延伸	72℃	30sec

检测片段小于300bp，qPCR仪上推荐执行以下程序(两步法)：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	95℃	10min*	1
变性	95℃	15 sec	40
退火和延伸	60℃	60 sec

注：由于本MasterMix中的Hot-start DNA聚合酶是经过化学修饰封闭的，初始变性95℃ 10分钟是必须的，时间过短会降低酶的活性。

实验结果分析
反应结束后加做融解曲线，以区分扩增产物及引物二聚体。根据扩增曲线和融解解曲线结果可进行PCR定量标准曲线的制作。

注意事项
1、本制品中不含内参染料ROX，ROX染料单独供应。客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX内参染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
2、本制品含SYBR Green I，强光下易分解，使用时避免长时间强光照射本制品。
3、建议在冰上配制qPCR反应液，再放入qPCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性，减少背景。
4、-20℃下保存时间较长，有微量沉淀产生，充分混匀后不影响使用。本制品已经优化了反应缓冲液中的Mg2+浓度，无需再调节Mg2+浓度。
5、模板DNA：用本产品，cDNA、基因组DNA、质粒DNA、病毒DNA等都可作为模板。在添加DNA模板时请注意模板量对PCR扩增的影响。本产品建议添加量为：cDNA添加量不应超过总反应体系的10%；基因组DNA为模板时，为避免在高浓度区域出现线性差的情况，请注意添加量小于500ng；病毒DNA也可作为PCR模板，添加时请以300ng为上限；由于质粒DNA浓度和拷贝数很高，在添加PCR模板之前最好进行稀释梯度试验，以便确定合适的质粒DNA拷贝数。
6、引物：
建议每条引物工作浓度200 nM～800 nM；为得到高灵敏度定量性的数据，引物的设计非常重要。以下列举了设计引物时需注意的一般事项。
a.引物长度请设定为18bp～30bp、GC含量为40%～65%；
b.扩增片段一般小于300bp，如可能请尽量设定在80bp～150bp。过长的片段容易导致扩增效率降低；
c.如设计mRNA为目的片段的引物，设计应尽量横跨内含子，以防止基因组DNA的扩增而引起假阳性；
d.请尽量选择Tm为65℃～67℃；
e.A、G、C、T整体分布尽量均匀。不要有部分的GC rich或AT rich(特别是3"端)。避开T/C(Polypyrimidine)或A/G(Polypurine)的连续结构；
f.避开引物内部或两条引物之间有3个碱基以上的互补序列。二条引物间的3"末端避开有2个碱基以上的互补序列；
g.引物设计完成后要使用BLAST检索确认引物的特异性。
此外，引物的纯化纯度对反应特异性有很大的影响。经过一般纯化、纯度较低的引物荧光强度散乱，容易产生非特异性产物，致使熔解曲线出现杂峰。请尽可能使用HPLC级别纯化，至少要用经Cartridge(OPC)级别以上纯化的引物。
7、对照设计：
a.No template control(NTC)：在qPCR反应体系中仅仅缺少模板。用以检测有无二聚体和试剂有无污染。
b.Reverse Transcripase control：用以评估逆转录反应中有无基因组DNA的污染。在逆转录反应中仅仅不含有逆转录酶。

常见问题及处理：

问题	可能原因	推荐的解决方法
无扩增曲线且无扩增产物(凝胶电泳)	反应体系中有PCR反应抑制剂	更换或纯化模板DNA。
	引物设计不合理	重新设计、合成引物。
	逆转录产物体积过量	减少逆转录产物量以不超过反应体系的10%。
	加样错误或有试剂未加	检查是否加了所有的所需试剂。
	引物的降解	通过PAGE电泳检测引物完整性。
	退火温度不正确	优化退火温度。
无扩增曲线但有扩增产物(凝胶电泳)	qPCR仪设置不正确	检查dye selction，reference dye是否选择正确
	失效的荧光检测	荧光检测应在PCR循环的退火/延伸阶段。
	荧光PCR仪问题	参考qPCR仪器说明书
阴性对照(NTC)有扩增曲线
	反应体系中有污染	qPCR片段较小，极易造成环境中气溶胶污染。如果融解曲线分析，解链温度和目的片段相同，凝胶电泳中NTC中的片段大小和目的片段相同，极有可能是反应体系中某一或某些试剂污染所引起的。建议换至没有污染源的环境进行PCR体系的配制。
	引物二聚体	进行溶解曲线分析，如果扩增曲线的解链温度小于80℃，凝胶电泳片段大小和目的片度不符。请重新设计引物。
		提高退火温度3℃。
PCR效率高于110%(斜率>-3.1)	有非特异性扩增	溶解曲线分析非特异性扩增；优化引物设计
PCR扩增效率低于90%(斜率<-3.6)	反应体系中有PCR反应抑制剂	更换或纯化模板DNA
	PCR扩增条件不合适引起扩增效率降低。	确认引物浓度。注意qPCR Master Mix是否失效。
	引物设计	重新设计引物，避免扩增区域的DNA二级结构。
实时荧光曲线线性不好	模板DNA含量较低或过高	应调整样品的DNA浓度。
	模板DNA中含有抑制PCR扩增反应的物质	对模板DNA进行纯化或更换模板。
	质量不好的逆转录试剂盒合成的cDNA，逆转录反应液中所含的物质可能抑制PCR反应。	请降低样品浓度，或将样品纯化后再进行反应。建议使用品牌质量较好的cDNA合成逆转录试剂盒。
CT值高于预期值	加入的模板量太少	适当增加模板量。
	样品被降解	检查样品的完整性。
	引物不合适	重新设计合成引物。
CT值低于预期值	加入了过多的模板	减少模板量。
	PCR产物太长	一般采用100-150bp的产物长度，一般不超过500bp
CT值的标准差>0.16	取样不准确	每种样品的反应混合液单独配制，充分混匀；
		qPCR之前要离心，管壁不要沾有反应液。
ΔRn值太小	PCR效率太低	优化PCR反应条件。
	目标模板数太低	增加模板量。
扩增曲线的荧光信号弱，或扩增曲线呈锯齿状	ROX添加量太大	使请根据ROX使用方法和使用的PCR仪进行确定ROX的添加量。
	荧光校正错误	请联*(代"系")PCR仪器工程师或参照PCR仪器的使用说明书，进行本底和荧光校正。
	PCR的延伸时间过短即荧光读取时间不充分，荧光收集不能充分完成。	适当增加延伸时间。
	以少于PCR仪器标准条件的反应体积进行扩增，荧光收集量的误差会增大	应增加反应体积以满足PCR仪器标准。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期半年。

2×SYBR qPCR MasterMix北京厂家现货正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：
ARB10172 人VIT A 免费代测 
甲基托布津 Creatinase 23564-05-8
PY02-200  麦芽汤培养基  250克  
半胱*酰甘*酸 Celite 545 19246-18-5
ARB12811 小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)尿液中含量检测 Mouse hepatitis b virus e antigen,hbeag ELISA KIT
Tween20/TBS溶液(10×TBST,pH8.0)   500ml
环磷酰胺 Lipoteichoic acid 6055-19-2
曲拉通x-405 Tetracycline HC1 92046-34-9
ARB13577 兔子白介素6(IL-6)检测服务 Rabbit interleukin 6,IL-6 ELISA KIT
BL0933 RBITC标记兔抗狗IgG抗体
75-12-7 Formamide   甲酰胺
ARB12861 小鼠心肌营养素1(CT-1)免费代测 Mouse cardiotrophln 1,ct-1 ELISA KIT
ARB12673 大鼠雌激素(E)Elisa定量检测 Rat estrogen,e ELISA KIT
2×SYBR qPCR MasterMix北京厂家现货关键词：2×SYBR qPCR MasterMix,RFT094,百奥莱博

PY04-095  利福平  1mg/支×10支  每支添加于100ml 改良CCDA琼脂培养基基础中，用于弯曲杆菌的选择性分离培养
阿拉伯胶水溶液(10%)   100ml
F010202 小鼠抗人IgG FC抗体 Monoclonal Mouse Anti-Human IgG(FC)
曲利*蓝 Palladium on carbon hydrogenation 72-57-1
ARB12333 大鼠卵泡抑素(FS)代做ELISA实验 Rat follistatin,fs ELISA KIT
ARB10606 人血红素氧化酶1(HO-1)含量测试 Human heme oxygenase 1,ho-1 ELISA KIT
BTN61203 高GC DNA清除剂,PCR级 High GC DNA Erasol
BFD078 犬细小抗原快速检测卡
DP418 RNAsin
羧肽酶A(牛胰) 4-C-3,5-DNBA 11075-17-5
ARB10484 人白介素2(IL-2)elisa测定使用说明书 Human interleukin 2,IL-2 ELISA KIT
PY02-183  麦芽汁琼脂  250克  
多聚甲醛-戊二醛混合固定液(2%/2.5%)   500ml
CYB165019 生物素化羊抗兔IgG
ARB13944 猪促卵泡素(FSH)ELISA检测服务 Porcine follicle-stimulating hormone,fsh ELISA KIT
ARB12814 小鼠乙型肝炎核心抗体(HBcAb)定量分析 Mouse hepatitis b virus core antibody,hbcab ELISA KIT
ARB11036 人纽蛋白(VCL)检测服务 Human vinculin,vcl ELISA KIT
ARB13824 猪I型前胶原羧基端肽(PICP)酶联免疫定量检测 Porcine carboxyterminal proPeptide of type i procollagen,picp ELISA KIT
ARB11510 人胸苷酸合成酶(TS)elisa检测 Human thymidylate synthetase,ts ELISA KIT
2×SYBR qPCR MasterMix北京厂家现货关键词：2×SYBR qPCR MasterMix,RFT094,百奥莱博


·Taq DNA聚合酶
编号：RFT102
英文名称：Taq DNA Polymerase
规格：500U(100μl)|5×500U(5×100μl)|2000U(400μl)|5×2000 U(5×400μl)
本品是从克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的，其分子量为94 KD。具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，无3’-5’外切酶活性。在PCR反应中，Taq DNA Polymerase延伸速度为1-2 kb/分钟，产物3’端带A，可直接用TA载体克隆。一般用于DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等，产物可以直接用于T/A载体克隆。本品浓度为5 U/μl。

活性定义：1单位(U) Taq DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

10×Taq Buffer：200 mM Tris-HCl (pH 8.4);200 mMKCl;15 mMMgCl2; 其它成分。

贮存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;100 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol

反应举例：
注意：以下举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物长短等具体情况，设定最佳反应条件。

以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段
1、反应体系的建立：50 ml反应体系如下(可根据比例放大或缩小反应体系)：

Template	<1μg
Primer 1(10μM)	1μl
Primer 2(10μM)	1μl
10×Taq Buffer	5μl
dNTP Mixture(10mM)	1μl
Taq (5 U/μl)	0.5μl
ddH2O	补至 50μl

2、PCR反应循环的设置：
94℃ 3min
94℃ 30sec
55℃ 30sec 30cycles
72℃ 1min
72℃ 5min
3、结果检测：反应结束后取5 ml反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。

储存条件：-20℃，有效期一年。

北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购2×SYBR qPCR MasterMix北京厂家现货。