高保真平末端pfu DNA聚合酶销售

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")高保真平末端pfu DNA聚合酶销*(代"售")，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：高保真平末端pfu DNA聚合酶销*(代"售")
规格：100U(40μl)|5×100U(5×40μl)
英文名：pfu DNA Polymerase
产地：国产|进口
编号：RFT101
本品是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶，该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外，还具有很强的3’-5’外切酶活性，增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比，pfu聚合酶热稳定性更好，更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A，为平滑末端，要通过平滑末端克隆法进行克隆。适用于高保真的DNA片段的扩增、DNA片段的平滑化。

试剂盒组成：
pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)-————————40μl
10×pfu PCR buffer(含Mg2＋)—————————1ml

活性定义：1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

贮存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol

使用方法：
1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

 

成分	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
Template	0.04-0.2 μg	0.1-0.5 μg	as you wish
Primer 1(10μM)	0.4μl	1μl	0.2μM
Primer 2(10μM)	0.4μl	1μl	0.2μM
10×pfu PCR buffer(含Mg2+)	2μl	5μl	1×
dNTP Mixture(10 mM)	0.4μl	1μl	200μM each
pfu (2.5 U/μl)	0.4μl	1μl	0.05U/μl
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl	-

注1：如果需要改变Mg2+浓度，根据下表调节

PCR反应体系中Mg2+终浓度	2 mM	2.5 mM	3 mM	4 mM
20μl反应体系中25 mM MgSO4加入量	0μl	0.4μl	0.8μl	1.6μl
50μl反应体系中25 mM MgSO4加入量	0μl	1μl	2μl	4μl

注2：配制反应液时，请最后加入pfu，因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性，有可能降解引物。
2、混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	3-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	50-60℃*	30 sec
延伸	72℃	0.5kb/min*
最后延伸	72℃	5 min	1

注：PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
1、pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性，所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb；同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物，所以应最后把pfu 酶到反应体系中，并立即进行 PCR 反应。
2、pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对 pfu 酶的活性无影响。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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·5×TBE
编号：RFT190
规格：500ml|10×500ml
本品常用于DNA琼脂糖凝胶电泳。

·GST标签抗体
编号：RFT171
英文名称：Mouse anti-GST Monoclonal antibody
规格：20μl
小鼠抗GST单抗克隆IgG，抗体推荐用于重组蛋白GST标签检测，不管GST 位于重组蛋白N 端或者C 端。本品采用蛋白A纯化自小鼠腹水，浓度为1mg/ml，

推荐应用比例(最优稀释比例依不同实验具体情况而定)：
Western Blot————1:3000～1:50000
ELISA-———————1:5000～1:200000

储存条件：-20℃

·4×蛋白上样缓冲液(非变性胶)
编号：RFT066
英文名称：4×Native-PAGE protein loading buffer
规格：10×1ml
本制品是蛋白质样品进行 Native-PAGE(非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶)电泳用的上样 Buffer。制品中含有示踪色素*酚蓝，可以确认电泳的进行情况。使用本制品，蛋白质在电泳胶中可以得到很好地分离。电泳后用考马斯亮蓝或者银染色等方法染色后，蛋白质电泳带能够得到清晰显示。非变性蛋白质电泳时，蛋白质的迁移速度与其固有的分子量、分子的形状及所带的电荷量等有一定关系。

使用方法：
使用前，先离心快甩使溶液至管底，以防开盖后造成污染。
向6μl的蛋白质样品中加入本制品 2μl(本制品与蛋白质样品按照 1：3的体积比混合)，振荡混匀后稍离心，即可上样电泳。本制品使用方便，可以根据蛋白质样品和电泳胶孔的体积，按照上述比例调整本制品的使用量。

注意事项：
1、为了您的安全，使用时请使用一次性手套操作，注意防护！
2、本制品不适用于变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶蛋白电泳。

储存条件：-20℃，避光。

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