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见说明书
- 英文名:
The total protein assay kit ( with standard : BCA method )
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大量供应
- 规格:
50T/185T
总蛋白定量测定试剂盒(带标准:BCA法)(微板法)技术问答
问:组织样本是怎么收集的?
答:样本的采集,取组织块,(一般需要0.2g以上)在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸吸干,准确称重,放入冻存管或离心管中-20度可以保存3个月,-80度可以保存半年。
问:在做ELISA时,配套96孔板被用完了,可以用其它的96孔板代替吗?稀释标准品的时候是怎么稀释的?。通过什么来确定这组数据可用或不可以用?
答:ELISA配套的酶标板上是包配抗体的,所有用完了就没有了,不可以用其它的96孔板代替,稀释标准品的时候您可以倍比稀释,取5根管子,里面各加120ul的标准品稀释液,然后从第5根管子开始,加120ul的标准品,混匀,从以稀释好的第5根管子里吸120ul到第4根管子里,这样一直到第一根管子。我们是根据您做的标准曲线成不成线性来判断这组数据可以用还是不可以用的。
问:做淀粉酶(AMS)实验时,测定管和空白管吸光度的差值一般控制在什么范围内就被认为值可以用?
答:一般的我们在做AMS时,测定管和空白管的吸光度OD值差值控制在0.05-0.150之间。被确定为可以用。
问:总抗氧化能力,能用酶标仪测吗?
答:不可以,总抗氧化能力容易浑浊,对光径也有要求,也没有标准品。
问:做got/gpt时标曲线一定要做吗?
答:我们说明书上的标准曲线,是给老师你做参考用的,不同的仪器做的标曲都不一样,所以为了您实验的准确性必须得做
问:测组织时为什么还要加测蛋白浓度?测血清时为什么不加测蛋白浓度?
答:因为测组织时要先匀浆,匀浆的程度不一样释放出的蛋白也不一样,我们测蛋白就是为了校正匀浆破碎的程度,而测血清时是不需要匀浆的所以不用加测蛋白浓度。
问:NO试剂盒测房水中NO可以吗?
答:如果可以,那标本取材有要求吗,比如:取的量50微升左右可以吗?保存条件?根据您们的经验是取一次做一次,还是可以全取完再一起做?
2、关于实验时的波长:必须是550还是可以有一个波动范围呢?
3、有些文献提到用硝酸还原酶法后在用“荧光计数法”计算,有必要吗?
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文献和实验【原创】新人马上要做western,贴出protocol和每日步骤,一为求大神指点解惑,二可与各位同仁相互交流
新的不能再新的菜鸟,没有师兄师姐带,也没有实验室老师带,完全自己摸索,到各个同学那里蹭经验。马上要做western,故将总结的western经验步骤po上来,一为求各位坛子里的大神垂怜,可以给予指导解惑,二来,也可与各位即将做western的新人一起交流心得,分享失败教训经验。若有不当之处,还请各位前辈、同仁给予指出,叩谢。 明日开始从提蛋白开始,今先po一部分步骤,明天晚上来汇报结果。 一、细胞总蛋白提取: 1、PIPA(碧云天)按100:1加入PMSF(碧云天),置于冰上备用
混匀,置于冰上 6.10min后,超声细胞仪打碎细胞,一般 7.4℃离心,13000rpm,5min 8.轻轻吸取上清液,置于新的EP管中,弃沉淀 二、标准曲线及蛋白浓度的测定(BCA法,适用于碧云天,参考说明书): 1.根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积试剂B(50:1)配置适量BCA工作液,充分混匀 2.将蛋白标准品按0,1,2,4,8,12,16,20μl加入96孔板的标准品孔中,并加PBS补足至20μl 3.加适当体积样品到样品孔中,加PBS补足至20μl,另设空白
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量(垂直板型电泳)(图)
⑥1ml注射器及6号长针头 ⑦微量注射器(10μl或50μl) ⑧水泵或油泵 ⑨真空干燥器 ⑩培养皿(直径120mm) 2.试剂: (1)标准蛋白质 目前国内外均有厂商生产低分子量及高分子量标准蛋白质成套试剂盒,用于SDS-PAGE测定未知蛋白质分子量。 ①高分子量标准蛋白试剂盒(Pharmacia公司产品,表中16-1)。 表16-1 5种标准蛋白质 同时按说明书要求处理 ②
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