R2A琼脂培养基（2015药典）

名称	英文名称	编号	规格	价格
R2A琼脂培养基（2015药典）	R2A Agar	LM0167-5	250g	240元
产品说明及用途:.用于纯化水中菌落总数的测定

R2A琼脂培养基用于纯化水中菌落总数的测定，（EP、USP、Chp标准）

配方：

 

酵母浸出粉          0.5

蛋白胨                0.5

酪蛋白水解物       0.5

葡萄糖                0.5

可溶性淀粉          0.5

磷酸氢二钾          0.3

无水硫酸镁       0.024

丙酮酸钠             0.3

琼脂                 15.0

pH值7.2 ± 0.2    25℃

 

 

 

调整PH值，使得R2A琼脂灭菌后的PH值为7.2±0.2。使用高压锅，121°C下高压灭菌15分钟。

不同药典关于纯化水的微生物检测方法和质量标准

中国药典

    【检查】 微生物限度 取本品不少于 1ml，按薄膜过滤法处理后，采用 R2A 琼脂培养基，30～35℃培养不少于 5 天，依法检查（通则 1105），每1ml 供试品中需氧菌总数不得过 100cfu。

操作简述：

    除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节 pH 值使加热后在 25℃的 pH值为 7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。 R2A 琼脂培养基适用性检查试验 照通则 1105 中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌。应符合规定。

USP标准

    在美国药典中，推荐使用0.45μm薄膜过滤法，并同时使用高营养培养基（平板计数琼脂培养基（PCA））于30-35℃培养72小时以上，和低营养培养基（R2A琼脂）于20-25℃培养96小时以上。检测标准为：≤100cfu/ml 。

操作简述：（可根据实际情况调整）

    量取10ml充分混匀的水样，以无菌操作加入安装好的薄膜过滤器内，过滤。并用 pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml,共冲洗1次。过滤后，取出滤膜，正面朝上贴于琼脂平板上。共制备 2张滤膜，一张滤膜贴于平板计数琼脂培养基平板（高营养培养基）置30℃~35℃生化培养箱中倒置培养2~3天，计数。另一张滤膜贴于R2A琼脂平板（低营养培奍基），置20℃~25℃生化培养箱倒置培养5~7天，计数。以培养基平板上菌落数生长较多者作为检测结果， 按比例折算为1ml纯化水中的微生物数量后报告。
EP标准

    在欧洲药典中使用薄膜过滤法（0.45μm 孔径滤膜），使用 R2A 琼脂培养基在 30℃～35℃培养 5 天以上。 质量标准：≤100cfu/mL。

操作简述：（可根据实际情况训整）

    量取 10ml 充分混匀的水样，以无菌操作加入 安装好的薄膜过滤器内，过滤。并用 pH7.0 的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每张滤膜 每次冲洗量为 100ml，共冲洗 1 次。过滤后，取出滤膜，正面朝上贴于 R2A 琼脂平板上, 置 30℃～35℃生化培养箱中倒置培养 5 天，计数。按比例折算为 1ml 纯化水中的微生物数量后 报告。

简述培养基制备的要求
使用脱水培养基和其他含有有害物质（胆盐或其它选择剂）的成分时，应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明配制。如质量/体积、pH、制备条件、灭菌条件和操作步骤等，并做好记录。
水
配制培养基使用蒸馏水或相同质量的水，以排除测试条件下抑制或影响微生物生长的物制。如果蒸馏水的用氯消毒的水制备的，在蒸馏前应先对氯进行中和（见GB/T6682）。盛放蒸馏水的容器最好是由中性材料制成的（如中性玻璃、聚乙烯等）。在初次使用前要确认容器中不含任何抑制因子。
R2A琼脂培养基（2015药典）为保证蒸馏水的质量，电阻率应至少达到300000Ωcm。
警告：采用离子交换器（去离子）生产的去离子水，微生物含量较高，这种水在过滤灭菌后仍可能带有细菌生长的抑制因子。所以配置培养基时最好不要使用这种方法生产的去离子水而应使用蒸馏水。
称量和复水
称量所需的脱水培养基（注意缓慢操作，必要时佩带口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有毒物质的培养基粉末），R2A琼脂培养基（2015药典）先加入少量的水，充分混合（注意避免培养基结块），然后再加入至所需的量。
溶解
脱水培养基加水后适当加热，并不停搅拌使其快速溶解，必要时，重新溶解。含琼脂的培养基在加热前应先浸泡几分钟。用各别成分制备的培养基应将不同成分分别加入适量的水中，并充分溶解，然后再加入到所需的量。
pH值的测定和调整
用pH计测pH，必要时进行调整。在实验室用各别成分制备培养基，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却到25℃时，pH的变化不应超过0.2个单位。一般使用浓度约为40g/L（约1mol/L）的氢氧化钠溶液或浓度为36.5g/L（约1mol/L）的盐酸溶液调整培养基的pH。
R2A琼脂培养基（2015药典）注：商品化的培养基高压灭菌后pH值可能变化很大，但采用优质蒸馏水或去离子水配配制时，灭菌前无需调节pH值。
分装
将制配制好的培养基分装到适当的容器中，根据不同用途，容器的体积可为培养基的1倍、2倍或3倍。
灭菌
培养基和试剂应采用湿热灭菌或过滤灭菌。亮绿培养基等特定的培养基中含有对光和热敏感的物质，只能煮沸灭菌。煮沸后应迅速冷却，避光保存（参见相关标准或供应商使用说明）。