北京植物基因组DNA提取试剂盒多少钱

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名称：北京植物基因组DNA提取试剂盒多少钱
规格：50次
英文名：Plant genomic DNA Extraction Kit
编号：RFT038
品牌：百奥莱博
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，能提取多种植物细胞/组织中的基因组DNA。离心吸附柱可以高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

试剂盒组成：

 

组份	RFT038(50次)	贮存方式
缓冲液AP1	25 ml	室温
缓冲液AP2	10 ml	室温
缓冲液AP3(浓缩液)	15 ml	室温
漂洗液PW(浓缩液)	15 ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	室温
RNase A(10 mg/ml)	300μl	-20℃
吸附柱CG(白色)	50套	室温
过滤柱CF	50套	室温
说明书	1份

提取获得效率：

材料	DNA得量(μg/100mg)
大麦	8-12
玉米	15-20
番茄	4-6
油菜	2-4
菠菜	5-10
烟草	20-25
小麦	25-30

准备工作：
1、准备液氮；65℃水浴；无水乙醇；1.5ml灭菌离心管。
2、按照标签所示在缓冲液AP3和漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3、每次使用前请检查缓冲液AP1，缓冲液AP2和缓冲液AP3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、取适量植物新鲜组织500mg-1g加入液氮充分研磨，取约100mg粉末置于1.5ml离心管中，加入400μl 缓冲液AP1和6μl RNaseA (10mg/ml)，漩涡震荡1分钟。
2、将离心管放在65℃水浴10分钟，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3、加入130μl 缓冲液AP2，颠倒混匀，冰浴5分钟。
4、12,000rpm离心5分钟。
注：此步骤离心去除去垢剂，蛋白以及多糖等杂质。
5、取上清(通常为400μl)转移到过滤柱CF中，12,000rpm 离心1分钟。
6、将滤出液转移到1.5 ml离心管中，加入1.5倍体积(例如400μl的上清液加600μl缓冲液AP3)缓冲液AP3(使用前请注意是否已经加入无水乙醇)，立即颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
7、吸取步骤6中的混合液加入到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，12,000 rpm离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放回收集管中。
注：离心吸附柱的最大容积是700μl，如果一次不能完全上柱，可以分次上柱离心，保证全部溶液全部加到离心柱中。
8、向吸附柱CG中加入500μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
9、重复步骤8。
10、可选步骤：如果离心柱的吸附膜上有颜色，向吸附柱CG中加入500μl无水乙醇，12,000 rpm离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
11、将吸附柱CG放回废液收集管中，12,000 rpm离心2分钟。
注：此步骤非常重要，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
12、将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100μl经65℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm g离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于50μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13、DNA产物-20℃保存。

DNA浓度及纯度检测：
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。

储存条件：室温，有效期12个月。

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·Taq DNA聚合酶
编号：RFT102
英文名称：Taq DNA Polymerase
规格：500U(100μl)|5×500U(5×100μl)|2000U(400μl)|5×2000 U(5×400μl)
本品是从克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的，其分子量为94 KD。具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，无3’-5’外切酶活性。在PCR反应中，Taq DNA Polymerase延伸速度为1-2 kb/分钟，产物3’端带A，可直接用TA载体克隆。一般用于DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等，产物可以直接用于T/A载体克隆。本品浓度为5 U/μl。

活性定义：1单位(U) Taq DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

10×Taq Buffer：200 mM Tris-HCl (pH 8.4);200 mMKCl;15 mMMgCl2; 其它成分。

贮存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;100 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol

反应举例：
注意：以下举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物长短等具体情况，设定最佳反应条件。

以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段
1、反应体系的建立：50 ml反应体系如下(可根据比例放大或缩小反应体系)：

Template	<1μg
Primer 1(10μM)	1μl
Primer 2(10μM)	1μl
10×Taq Buffer	5μl
dNTP Mixture(10mM)	1μl
Taq (5 U/μl)	0.5μl
ddH2O	补至 50μl

2、PCR反应循环的设置：
94℃ 3min
94℃ 30sec
55℃ 30sec 30cycles
72℃ 1min
72℃ 5min
3、结果检测：反应结束后取5 ml反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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