零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒库存

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒库存在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒库存
规格：20T
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：SY0283
英文名：Zero TOPO-Blunt Cloning Kit
本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA片段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：
1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。
2）高效，无自连现象，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；
3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。
4）可连接长达10kb目的产物。

产品用途：平末端PCR产物的快速克隆。克隆后PCR产物的快速测序【使用M13F/M13R引物】。

产品组份：
pESI-Blunt vector 30ng/µl)————20µl
1kb control insert(40ng/µl)————5µl
10×Enhancer————————20µl

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

我公司的零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒库存，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·MTF1-GFP报告基因质粒
编号：SY0166
英文名称：MTF1 GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
MTF1 GFP Reporter Plasmid是用于检测MTF1转录活性水平为目的的报告基因。MTF1(Metal regulatory transcription factor 1)对重金属诱导的金属硫蛋白以及涉及体内金属平衡和细胞应激反应的基因的转录调控起关键的作用。

MTF1-GFP报告基因主要检测细胞Heavy Metal Stress信号通路中MTF1的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMMTF1-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个MTF1结合位点，可以高效地检测MTF1的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得MTF1-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM MTF1 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMMTF1-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。


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·pUM19-T Vector TA克隆载体
编号：SY0022
规格：5μg
pUM19-T载体是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。特殊的纯化方式使得超过99%的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。连接使用的PCR 片段3’端应带有A 末端；Pfu DNA Polymerase等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。本品随载体提供对照片段(500bp)用于阳性对照反应。

1.将载体置于冰上融化。建议第一次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。

2.按下表配置连接反应体系
ddH2O——To 10 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1μl (约0.025 pmol)
插入片段*——0.075 pmol～0.25 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl
注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。

3.对照反应体系（可选）：
ddH2O——6 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1 μl (约0.025 pmol)
500 bp control insert(50 ng/μl)——1 μl (约0.15 pmol)
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl

4.轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。
5.转化：
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90秒后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
注：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

储存条件：-20℃。

注意事项
1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。


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·GCNF-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0129
英文名称：GCNF Luciferase Reporter Plasmid
规格：1μg
GCNF-Luc荧光素酶报告基因质粒（GCNF luciferase reporter plasmid）是用于检测GCNF转录活性水平为目的的报告基因。GCNF(germ cell nuclear factor)是核受体超家族成员之一，GCNF主要功能是抑制基因表达,它可以促进Oct-4基因的甲基化,使Oct-4发生基因沉默.GCNF基因高度表达在发育中的神经系统、胎盘、发育中的生殖细胞.GCNF基因表达具有的时空特性,提示GCNF在胚胎发生以及配子形成过程中发挥着重要作用.

GCNF-Luc荧光素酶报告基因质粒主要应用于Germ Cell Nuclear Factor信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。

pGMGCNF-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个GCNF结合位点，可以高灵敏度地检测GCNF的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得GCNF报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



使用说明
pGMGCNF-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

·冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液
编号：SY0268
英文名称：ICE Tissue Stabilizer
规格：100ml
本品是一种新型的冰冻组织过渡溶液，可以帮助解冻冰冻组织，同时保护RNA完整性，从而可以使冰冻组织转变到普通的匀浆方法易于处理的状态，以提取高质量的RNA。处理后的冰冻组织不需要在匀浆前将其碾磨成粉，甚至在匀浆前可以进一步对组织进行切割。加入RNAKeeper-ICE溶液后，组织从坚硬的冰冻状态转变为柔软状态，此时该溶液渗入组织，使RNA酶失活。用本品溶液处理后，组织可以在室温下操作而不用担心RNA会发生降解。而且，样品能被安全的称重，进一步切割，或者进行多种实验而不影响RNA的质量。处理后的组织样品可以直接加入到裂解溶液中破碎，也可以置于-20℃长期保存。

本产品适用于动物组织以及培养细胞、白细胞。经测试，可用于肝、肾、脾、肺、心、胸腺、胰等组织的保存。

本产品与基于异硫*酸胍的RNA提取试剂如Total RNA Extraction Reagent, Trizol，或基于离心柱的RNA提取试剂盒兼容。

应用实例

1. 将本品在-70℃或-80℃预冷。
2. 样品保存：
A.动物组织：按100 mg组织比不小于1 ml 本品的比例，将冰冻组织浸没于预冷的本品中。注意：组织块的厚度应不超过0.5 cm，否则会影响本品的渗透效率，导致RNA稳定效果变差。
B.培养细胞、白细胞：收集细胞，用PBS清洗后加入至少10倍体积本品，盖紧管盖，上下颠倒数次。此时沉淀是否被完全悬浮对实验无影响。
3. 将浸没于本品的组织转移至-20℃存放。至少16小时后，组织即可匀浆进入后续提取过程；若不立即匀浆，组织可继续在-20℃稳定存放6个月。这个过程中，组织可从溶液中取出，在室温进行切割、称重等操作(注意在室温暴露的时间不要超过30分钟)后继续浸没在本品中保存。
4. RNA提取：将组织取出，用镊子轻轻挤掉多余的本品溶液，置于裂解液中，立刻匀浆。如果是细胞样品，10000g，4℃离心1分钟，弃上清，加入裂解液。

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